茶黃素測定標準的建立以及茶黃棓靈類化合物的酶促合成.pdf

1、茶黃素是一類具有苯并卓酚酮結構的色素化合物，對構成紅茶―紅湯紅葉的品質特征有重要作用。近年來，眾多的藥理學實驗表明茶黃素具有抗氧化、抗癌等生物學活性，茶黃素的應用基礎研究受到了廣泛的關注。本試驗主要研究內容和研究結果如下：
　　茶黃素定量分析標準的建立。運用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法對紅茶和茶制品中主要的4種茶黃素進行檢測方法研究，制定農(nóng)業(yè)行業(yè)標準。該方

2、法采用反相C18柱進行梯度洗脫，檢測波長為280nm，以茶黃素標準物質的保留時間定性，面積外標法定量。此法所采用的標準曲線（0.1μg/mL~40μg/mL）具有良好的線性關系（R2>0.9999），檢測限為0.04μg/mL，各組分的加標回收率為90.03％~105.05%，相對標準偏差小于5%。3家實驗室對此檢測方法進行驗證，均證明了此方法的可行性及可靠性。本方法可簡便、快速、準確地檢測紅茶、速溶紅茶及冰紅茶中主要的4種茶黃素。

3、r>　　微孔濾膜的使用對茶黃素類和兒茶素類等成分分析的影響。在上述茶黃素檢測方法的建立構成中，筆者著重研究了微孔濾膜在HPLC定量分析紅茶及紅茶制品中茶黃素類和兒茶素類等成分的影響。試驗選擇了2種孔徑5個廠家生產(chǎn)的6種不同材質的微孔濾膜，對紅茶及紅茶提取物中的茶黃素類、兒茶素類、咖啡堿的吸附作用進行研究。結果表明，尼龍濾膜對10μg/mL茶黃素(theaflavin，TF)標品幾乎完全吸附，其回收率低于1%，而親水型聚四氟乙烯（poly

4、tetrafluoroethylene，PTFE）和聚偏氟乙烯（poly vinylidene fluoride，PVDF）濾膜在TF標品中回收率能達到97%以上；另外，不同廠家的濾膜性能差異顯著，以醋酸纖維濾膜為例，廠家1和廠家3生產(chǎn)的同種濾膜對TF標品的回收率分別為11.86%和99.95%。結果表明，微孔濾膜的使用是影響茶黃素和兒茶素等成分準確測定的關鍵前處理步驟。
　　酶促合成茶黃素。論文研究了乙醇/水介質中辣根過氧化物酶

5、（horseradish peroxidase，HRP）酶促合成茶黃棓靈-3-沒食子酸酯的方法。系統(tǒng)研究了反應體系的pH值、過氧化氫（H2O2）量、反應溫度以及底物配比等因素對酶促反應的影響；實驗運用LC-MS對產(chǎn)物進行了結構表征與分析，證明得到了茶黃棓靈-3-沒食子酸酯；通過乙醇/水介質顯著提高了酶促合成茶黃棓靈-3-沒食子酸酯的合成產(chǎn)率，優(yōu)于單一水溶劑的環(huán)境。
　　論文研究了單寧酶和過氧化物酶先后作用表沒食子兒茶素沒食子酸酯(

6、epigallocatechin-3-gallate，EGCG)一鍋合成茶黃棓靈的方法。此方法以EGCG為起始原料，經(jīng)單寧酶水解作用后加入HRP氧化縮合，兩步一鍋合成茶黃棓靈。本文并嘗試了先利用HRP將EGCG與連苯三酚反應合成茶黃棓靈-3-沒食子酸酯后再經(jīng)單寧酶水解，亦可形成茶黃棓靈。論文并進一步考察了單寧酶水解EGCG制備茶黃棓靈前體物質表沒食子兒茶素（epi-gallocatechin，EGC）和沒食子酸（gallic acid，