脂肪酶在催化拆分對甲砜基苯絲氨酸乙酯中的應(yīng)用.pdf

1、D-蘇式-對甲砜基苯絲氨酸乙酯,是氟苯尼考的重要合成中間體之一。目前制備對映體純的D-蘇式-對甲砜基苯絲氨酸乙酯的途徑大都為化學(xué)法途徑。以酶法手性拆分獲得對映體純的D-蘇式-對甲砜基苯絲氨酸乙酯在國內(nèi)外幾乎沒有報道。
　　 本文以從土壤中篩選產(chǎn)脂肪酶微生物與實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有商品脂肪酶為基礎(chǔ),建立了脂肪酶平臺,供不對稱水解DL-蘇式-對甲砜基苯絲氨酸乙酯進(jìn)行酶源選擇。利用改進(jìn)型初篩培養(yǎng)基及傳統(tǒng)復(fù)篩培養(yǎng)基,共從65份土壤樣品中高效地篩選出

2、了19株產(chǎn)脂肪酶微生物,其中酶活相對較高的菌株有9株。
　　 研究過程中發(fā)現(xiàn)對甲砜基苯絲氨酸乙酯能夠在純水中自發(fā)水解及在有機(jī)溶劑脂肪酶水解的過程中發(fā)生一系列副反應(yīng),通過正相、反相HPLC、LC-MS、1H NMR等分析檢測方法,共檢測出了10種副產(chǎn)物,同時也考察了一些因素,如pH、溫度、底物濃度等對于副反應(yīng)的影響;通過觀察研究,推理出了合理的副反應(yīng)機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn),對甲砜基苯甲醛在整個副反應(yīng)中作為一個關(guān)鍵的中間副產(chǎn)物存在:以一定速

3、率水解的對甲砜基苯絲氨酸乙酯能夠作為副反應(yīng)的驅(qū)動力,從而促進(jìn)副反應(yīng)的進(jìn)行;在純水中,加入一些金屬離子能夠有效地抑制p-MPSE自發(fā)副反應(yīng)的發(fā)生。
　　 通過研究,確立了對甲砜基苯絲氨酸乙酯酶促不對稱水解最適微水有機(jī)溶劑為叔丁醇,最適脂肪酶酶源為Novozyme 435;通過考察各類因素對酶促不對稱水解對甲砜基苯絲氨酸乙酯的影響,確定了最佳的催化拆分條件;對于能夠發(fā)揮抑制副反應(yīng)效用的Zn2+的考察顯示,Zn2+的加入將加快底物的轉(zhuǎn)