釀酒酵母ALD4基因敲除與GPD1基因沉默研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、乙酸與甘油是釀酒酵母乙醇發(fā)酵過程主要的副產(chǎn)物。本研究通過敲除釀酒酵母Y01乙醛脫氫酶ALD4基因，獲得了ALD4基因缺失的突變體DY01；通過構建反義表達載體抑制釀酒酵母甘油脫氫酶關鍵基因GPD1的轉(zhuǎn)錄，以促進乙醇發(fā)酵。結果如下：
　　 1.采用以PCR為基礎的loxP-KanMX-loxP序列組件和Cre/loxP刪除系統(tǒng)刪除了釀酒酵母工程菌Y01乙醛脫氫酶ALD4基因，獲得突變株DY01；釀酒酵母ALD4缺失菌株DY01發(fā)酵

2、液乙醇比出發(fā)菌株釀酒酵母Y01提高了6.88％。
　　 2.通過構建釀酒酵母實驗菌株INVSc1甘油脫氫酶GPD1基因5’UTR反義表達載體pYES2.0-GPD1，實驗組比對照組的3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）的比活力最大下降了24.03％；甘油產(chǎn)量含量下降幅度最大達到了25.43％，而且甘油含量的下降滯后于3-磷酸甘油脫氫酶活性的下降。
　　 3.通過構建釀酒酵母突變株DY01甘油脫氫酶GPD1基因5’UTR反義表達

3、載體pYES2.0-GPD1/KanMX，獲得釀酒酵母DRY01菌株；釀酒酵母DRY01菌株的甘油脫氫酶（GPDH）的比活力比出發(fā)菌株DY01下降了20.04％；甘油含量下降幅度最大達到了19.14％；同時，釀酒酵母DRY01發(fā)酵液乙醇含量比釀酒酵母DY01提高了9.74％，比原始菌株Y01乙醇含量提高了14.01％。
　　 建立在酵母高效同源重組機制的loxP-KanMX-loxP刪除組件與Cre/loxP系統(tǒng)是進行釀酒酵母基

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