酵母菌3-磷酸甘油脫氫酶基因（gpd1）的克隆及其在高滲脅迫下mRNA轉(zhuǎn)錄水平的差異.pdf

1、環(huán)境滲透壓的變化對(duì)于酵母細(xì)胞的生存有著十分重要的影響。當(dāng)酵母菌處于高滲透壓環(huán)境中的時(shí)候，酵母菌的生存將受到極大的威脅。在這個(gè)時(shí)候酵母菌可以通過(guò)增加胞內(nèi)甘油的積累水平來(lái)減小細(xì)胞膜內(nèi)外的滲透壓差以實(shí)現(xiàn)對(duì)高滲脅迫的適應(yīng)。GPD1是一個(gè)由391個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，它能催化磷酸二羥丙酮生成3-磷酸甘油，在酵母細(xì)胞適應(yīng)高滲透壓脅迫的過(guò)程中起著重要的作用。高滲脅迫下GPD1的表達(dá)量和它的酶活力都將會(huì)有一定程度的上升，而且gpd1基因的突變會(huì)直接導(dǎo)致

2、酵母細(xì)胞無(wú)法在高滲環(huán)境中生長(zhǎng)。 本研究選取生產(chǎn)中常用的酵母菌株YY、FHS和WFB，通過(guò)實(shí)驗(yàn)分析造成三種酵母菌株抗高滲能力差異的原因。首先分別用濃度為1％、3％、5％的NaCl對(duì)酵母菌株YY、FHS和WFB進(jìn)行處理比較高滲脅迫對(duì)這三個(gè)菌株生長(zhǎng)速度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在NaCl的濃度為1％和3％時(shí)，NaCl對(duì)FHS菌株生長(zhǎng)速度的影響明顯小于YY和WFB菌株；另外，在NaCl的濃度為1％時(shí)，NaCl對(duì)YY菌株生長(zhǎng)速度的影響明顯小于W

3、FB菌株；當(dāng)NaCl的濃度為5％時(shí)，NaCl對(duì)這三個(gè)菌株生長(zhǎng)速度影響的強(qiáng)弱依次為WFB、FHS、YY，但差距并不明顯。由此可以看出，F(xiàn)HS菌株耐高滲能力最強(qiáng)、YY菌株次之、WFB菌株最差。 分別克隆酵母菌株YY、FHS和WFB的gpd1基因片段并測(cè)序，分析這三個(gè)酵母菌株gpd1基因序列的差異。用生物學(xué)軟件VectorNTI將YY、FHS和WFBgpd1基因序列與國(guó)際基因庫(kù)(GeneBank)中的gpd1序列(X76859)進(jìn)行

4、對(duì)比，發(fā)現(xiàn)其同源性分別為99.32％、99.83％、99.83％。將這些DNA序列轉(zhuǎn)化為氨基酸序列，再用VectorNTI比對(duì)這些氨基酸序列，結(jié)果發(fā)現(xiàn)受檢菌株YY、FHSgpd1基因序列對(duì)應(yīng)的氨基酸序列與GeneBank中g(shù)pd1序列(X76859)對(duì)應(yīng)的氨基酸序列完全一致，而WFB與它們的同源性只有98.5％。 分別用濃度為1％、3％、5％的NaCl對(duì)酵母菌株YY、FHS和WFB進(jìn)行處理，比較高滲脅迫對(duì)這三個(gè)菌株gpd1基因