鹽藻(Dunaliella viridis)甘油-3-磷酸脫氫酶基因DvGPDH1和DvGPDH2的克隆與功能分析.pdf

1、上海大學(xué)碩士學(xué)位論文鹽藻（Dunaliellaviridis）甘油3磷酸脫氫酶基因DvGPDH1和DvGPDH2的克隆與功能分析姓名：何云霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：宋任濤許政暟20080601上海人學(xué)碩十學(xué)位論文了它們編碼的蛋白都具有GPDH活性；而這兩個(gè)基因都不能互補(bǔ)酵母SERB突變體ser2A和大腸桿菌SERB突變體SK472，這表明DvGPDHl和DvGPDH2蛋白不具有SERB活性。但是，DvGPD

2、Hl和DvGPDH2基因在缺失SERB結(jié)構(gòu)域區(qū)段后能更好的互補(bǔ)突變體gpdld，這表明SERB結(jié)構(gòu)域很可能是一個(gè)調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域，功能是調(diào)節(jié)DvGPDHl和DvGPDH2蛋白的GPDH活性。為了研究DvGPDHl和DvGPDH2在鹽藻滲透調(diào)節(jié)過(guò)程中的作用，我們利用QPCR的方法對(duì)這兩個(gè)基因在不同鹽脅迫下的表達(dá)模式進(jìn)行了分析。在穩(wěn)定生長(zhǎng)于不同鹽濃度下的鹽藻細(xì)胞中，DvGPDHl和DvGPDH2的表達(dá)隨著細(xì)胞外鹽濃度的升高(O52M)而逐漸升高；

3、但當(dāng)細(xì)胞外鹽濃度升至3M以上(3M5M)時(shí)，兩個(gè)基因的表達(dá)受到抑制。當(dāng)鹽藻細(xì)胞經(jīng)受O5M一15M鹽震蕩脅迫后，DvGPDHl和DvGPDH2的表達(dá)模式呈現(xiàn)出三個(gè)不同的階段：早期基因表達(dá)誘導(dǎo)階段，中期基因表達(dá)抑制階段，后期基因表達(dá)回復(fù)階段。這說(shuō)明在鹽震蕩條件下鹽藻GPDH基因在轉(zhuǎn)錄水平上受到調(diào)控，同時(shí)揭示了基因的表達(dá)受到產(chǎn)物反饋抑制調(diào)控。比較DvGPDHl和DvGPDH2基因的表達(dá)模式，我們發(fā)現(xiàn)DvGPDH2基因的表達(dá)相對(duì)較高，在鹽脅迫下

4、更為穩(wěn)定并且對(duì)于產(chǎn)物反饋抑制調(diào)控更為不敏感，這表明DvGPDH2可能編碼的是鹽藻中“滲透條件型”的GPDH。為了探討DvGPDHl和DvGPDH2基因在轉(zhuǎn)基因植物方面的應(yīng)用，我們構(gòu)建了CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)Dvd伽和DvGj刪基因的植物表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物轉(zhuǎn)化，獲得了轉(zhuǎn)DvGPDHl和DvGPDH2基因的擬南芥，為利用DvGPDHl和DvGPDH2培育耐鹽轉(zhuǎn)基因植物打下了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：鹽藻；甘油3磷酸脫氫酶；功能分析；基因表