鹽藻(Dunaliella viridis)甘油-3-磷酸脫氫酶基因DvGPDH1和DvGPDH2的克隆與功能分析.pdf

1、上海大學碩士學位論文鹽藻（Dunaliellaviridis）甘油3磷酸脫氫酶基因DvGPDH1和DvGPDH2的克隆與功能分析姓名：何云霞申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：宋任濤許政暟20080601上海人學碩十學位論文了它們編碼的蛋白都具有GPDH活性；而這兩個基因都不能互補酵母SERB突變體ser2A和大腸桿菌SERB突變體SK472，這表明DvGPDHl和DvGPDH2蛋白不具有SERB活性。但是，DvGPD

2、Hl和DvGPDH2基因在缺失SERB結構域區(qū)段后能更好的互補突變體gpdld，這表明SERB結構域很可能是一個調節(jié)結構域，功能是調節(jié)DvGPDHl和DvGPDH2蛋白的GPDH活性。為了研究DvGPDHl和DvGPDH2在鹽藻滲透調節(jié)過程中的作用，我們利用QPCR的方法對這兩個基因在不同鹽脅迫下的表達模式進行了分析。在穩(wěn)定生長于不同鹽濃度下的鹽藻細胞中，DvGPDHl和DvGPDH2的表達隨著細胞外鹽濃度的升高(O52M)而逐漸升高；

3、但當細胞外鹽濃度升至3M以上(3M5M)時，兩個基因的表達受到抑制。當鹽藻細胞經受O5M一15M鹽震蕩脅迫后，DvGPDHl和DvGPDH2的表達模式呈現(xiàn)出三個不同的階段：早期基因表達誘導階段，中期基因表達抑制階段，后期基因表達回復階段。這說明在鹽震蕩條件下鹽藻GPDH基因在轉錄水平上受到調控，同時揭示了基因的表達受到產物反饋抑制調控。比較DvGPDHl和DvGPDH2基因的表達模式，我們發(fā)現(xiàn)DvGPDH2基因的表達相對較高，在鹽脅迫下

4、更為穩(wěn)定并且對于產物反饋抑制調控更為不敏感，這表明DvGPDH2可能編碼的是鹽藻中“滲透條件型”的GPDH。為了探討DvGPDHl和DvGPDH2基因在轉基因植物方面的應用，我們構建了CaMV35S啟動子驅動Dvd伽和DvGj刪基因的植物表達載體，通過農桿菌介導的植物轉化，獲得了轉DvGPDHl和DvGPDH2基因的擬南芥，為利用DvGPDHl和DvGPDH2培育耐鹽轉基因植物打下了基礎。關鍵詞：鹽藻；甘油3磷酸脫氫酶；功能分析；基因表