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文檔簡介
1、該論文主要完成杜氏鹽藻硝酸鹽還原酶基因選擇標(biāo)記建立過程中NR基因的克隆、表達(dá)載體的構(gòu)建、NR基因完整性的鑒定以及基因槍轉(zhuǎn)化方法的研究,為進(jìn)一步建立杜氏鹽藻NR基因選擇標(biāo)記奠定基礎(chǔ).結(jié)論1.克隆得到完整的NR cDNA序列,全長3696bp,包含了全部編碼序列(2700bp),編碼一個(gè)全長900個(gè)氨基酸的蛋白序列,該序列與其它微藻的NR具有較高同源性.2.該基因所推導(dǎo)的氨基酸序列有三個(gè)保守性較高的結(jié)構(gòu)域,分別與亞硫酸氧化酶、細(xì)胞色素b5以
2、及NADH:細(xì)胞色素b5還原酶有較高同源性,符合NR的結(jié)構(gòu)域特征.3.在杜氏鹽藻NR氨基酸序列中,具有兩種以上同義密碼子的氨基酸偏好使用以C/G為結(jié)尾的密碼子.4.該研究構(gòu)建杜氏鹽藻真核表達(dá)載體,該載體可用于轉(zhuǎn)化杜氏鹽藻NR基因突變藻株進(jìn)而建立鹽藻NR基因選擇標(biāo)記.5.構(gòu)建了杜氏鹽藻NR基因原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌中融合表達(dá);37℃誘導(dǎo)時(shí),融合蛋白以包涵體形式存在,降低誘導(dǎo)溫度可以增加蛋白的可溶性;硝酸鹽還原酶活力測定顯示MBP-NR
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