野油菜黃單胞菌3-磷酸甘油醛脫氫酶的研究.pdf

1、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種（Xanthomonas campestris pv．campestris，Xcc）是一種能在全球范圍內(nèi)引起十字花科植物發(fā)生黑腐病的革蘭氏陰性細(xì)菌。其產(chǎn)生的胞外多糖（extracellular polysaccharide，EPS）是一個重要的致病因子。由于Xcc的EPS具有獨特的理化性質(zhì)，因此在工業(yè)中具有廣泛的用途，其商品名又稱黃原膠。
　　 根據(jù)基因組注釋，Xcc8004基因組中一個編號為XC09

2、72的基因編碼產(chǎn)物可能是3-磷酸甘油醛脫氫酶，該酶是糖酵解途徑和糖異生途徑的重要成分。為了研究XC0972基因編碼產(chǎn)物的生化功能，本工作通過PCR擴增XC0972 ORF的DNA同源片段，克隆到表達(dá)載體pQE30上，并在大腸桿菌JM109細(xì)胞中誘導(dǎo)表達(dá)，獲得帶有六個組氨酸純化標(biāo)簽的融合蛋白XC0972-His6。對XC0972-His6的生化測定發(fā)現(xiàn)，該融合蛋白具有3-磷酸甘油醛脫氫酶的活性。進一步分析發(fā)現(xiàn)，該融合蛋白的酶活性最適溫度為

3、35℃，最適pH為9.5。金屬離子Mg2+能使酶活性增強，pb2+不影響活性，Ni2+、Fe2+抑制活性，Mn2+、Zn2+、Ca2+、Cd2+、Fe3+、Cu2+、Al3+能使酶失活．另外，烷化劑對酶活性起抑制作用．在最適條件下，XC0972-His6的Km為0.57mM，Vmax為467.19 U/mg．
　　 對XC0972整合突變體NK0972的致病性、EPS產(chǎn)量、和生長繁殖進行分析發(fā)現(xiàn)，突變體的致病性和EPS產(chǎn)量與野生