LMWH-SOD的制備、二級結(jié)構(gòu)分析及其對腦缺血再灌注損傷防治作用機制研究.pdf

1、腦缺血再灌注損傷(Brain ischemia and reperfusion injury,BIRI)是由多種機制參與的由于腦缺血及再灌注導(dǎo)致的病理性過程,其中與活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)有密切關(guān)聯(lián)的氧化壓(Oxidative stress)的產(chǎn)生和白細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)是導(dǎo)致BIRI的兩個基本要素.為了改善天然SOD的理化性質(zhì)和生物學(xué)活性,增強其對BIRI的防治作用,我們采用LWMH對SOD

2、進行化學(xué)修飾,在本課題研究中探討了修飾酶LMWH-SOD的制備、二級結(jié)構(gòu)及其血腦屏障通透性,此外,還研究了沙土鼠腦缺血再灌注過程中LMWH-SOD對于炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6表達的影響.本研究取得的結(jié)果和結(jié)論主要有:(1)優(yōu)化了LWMH對SOD的修飾過程,實現(xiàn)了對LMWH-SOD的分級分離,獲得了在現(xiàn)有修飾條件下的最優(yōu)修飾產(chǎn)物L(fēng)MWH-SOD2.(2)首次運用FTIR技術(shù)和CD光譜技術(shù)對LMWH-SOD的二級結(jié)構(gòu)進行

3、分析,認(rèn)為LMWH對SOD的化學(xué)修飾增加了酶蛋白分子二級結(jié)構(gòu)中α-螺旋構(gòu)象,而對構(gòu)成酶活性中心同時也是分子二級結(jié)構(gòu)中優(yōu)勢構(gòu)象的β-構(gòu)象的影響很微弱(β-構(gòu)象比例稍有下降).(3)首次運用Iodogen放射性碘標(biāo)記技術(shù)探討了LMWH-SOD透過血腦屏障的能力和在小鼠體內(nèi)分布情況,證明LMWH-SOD對腦缺血損傷鼠具有一定的血腦屏障透過能力,對正常動物腦組織不具有通透性,同時發(fā)現(xiàn)LMWH-SOD具有腎臟分布特異性.(4)首次證明在蒙古沙土鼠