硫酸粘桿菌素菌種選育與發(fā)酵工藝研究.pdf

1、粘菌素又名粘桿菌素、克利斯汀(colistin)、多粘菌素E(Polymyxin E)、抗敵素等,是由多粘桿菌培養(yǎng)液中獲得的堿性瑣環(huán)狀多肽類(polypeptide)抗生素,為多粘菌素E1和E2的混合物。為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末,微溶于水,不易潮解。其硫酸鹽硫酸粘菌素性質(zhì)十分穩(wěn)定,為白色粉末,易溶于水,微溶于甲醇、乙醇,不溶于丙酮、乙醚等。在pH值為2—6范圍內(nèi)相當(dāng)穩(wěn)定。耐熱,消化道不易吸收,排泄迅速、毒性小,無副作用,不易產(chǎn)生耐藥菌株,

2、是最安全的畜禽促生長抗生素之一。本課題根據(jù)硫酸粘菌素的生物合成特點(diǎn),運(yùn)用UV照射、NTG誘變以及抗結(jié)構(gòu)類似物α-氨基丁酸等手段進(jìn)行菌種選育。研究了以多粘類芽胞桿菌(Paenibacillus polymyxa)6#作為出發(fā)菌株,經(jīng)過紫外線誘變選育,獲得了一株遺傳性能穩(wěn)定且硫酸粘菌素發(fā)酵單位比出發(fā)菌株提高15%的新菌株37#。然后又對該菌株再采用亞硝基胍(NTG)誘變,以纈氨酸結(jié)構(gòu)類似物氨基丁酸作為篩選因子又得到一株新的產(chǎn)量提高18%的菌

3、株42#,對此新的高產(chǎn)菌株在搖瓶條件下的工藝進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容包括種子培養(yǎng)時(shí)間、接種量、初始pH值、培養(yǎng)溫度、碳源、氮源、C/N比等進(jìn)行優(yōu)化,確定了優(yōu)化后的培養(yǎng)基C源為葡萄糖10%與淀粉90%的復(fù)合C源,N源為無機(jī)N源硫酸銨0.1%與有機(jī)N源麥胚粉0.3%相結(jié)合的復(fù)合N源,C源、N源最佳的比例為2.5：1。種子最佳培養(yǎng)時(shí)間為20~24小時(shí),最適宜的接種量為6%,初始pH控制在6.4~6.6最佳。在搖瓶試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步在18噸發(fā)酵罐上