殺蟲抗生素產(chǎn)生菌GX-29的選育、發(fā)酵優(yōu)化及其產(chǎn)物的分離純化研究.pdf

1、本文研究的殺蟲抗生素產(chǎn)生菌GX-29是實驗室自行分離得到的一株極暗黃鏈霉菌(Streptomyces fulvissimus)，其產(chǎn)物對鹵蟲和家蠶有很好的殺滅作用，并對稻瘟菌(Magnaporthe grisea)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、華麗曲霉(Aspergillus ornatus)、粘紅酵母(Rhodotorula glulinis)等具有較強的抑制作用。本文以該菌株為誘變出發(fā)菌株，以枯草芽孢桿菌為初篩

2、指示菌，以鹵蟲為復篩指示蟲，對該菌株進行了誘變育種；利用鹵蟲活性追蹤法，對其發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行了優(yōu)化；研究了活性物質(zhì)的部分理化性質(zhì)，并對其分離純化路線進行了探討。研究的結(jié)果如下： 1．由出發(fā)菌株O＃(殺蟲的半致死時間為26.4 min)，依次進行紫外線誘變、60Co誘變、微波誘變，每步篩選出的高產(chǎn)菌株用于下一步誘變處理。紫外線誘變獲得菌株101＃(半致死時間22.6 min)，60C0誘變獲得菌株202。(半致死時間21.

3、3 min)，微波誘變獲得菌株310＃(半致死時間19.2 min)。三種誘變方法中，紫外線誘變的誘變貢獻率最高，達到52.78％，其次微波誘變，60Co誘變最小，僅到18.06％。 2．對310＃菌株的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行了單因素和正交優(yōu)化實驗，得出最優(yōu)培養(yǎng)基組合為：可溶性淀粉1.6％，葡萄糖0.3％，酵母粉0.4％，K2HPO4 0.1％，NaCl 0.1％，MgSO4·7H2O 0.1％，F(xiàn)eSO4 0.001％；

4、最優(yōu)發(fā)酵條件組合為：溫度為28℃，發(fā)酵時間為4d，發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH為7.4，搖床轉(zhuǎn)速為150 r/min，接種量為8％，裝液量為70mL/250mL，種齡為48h。在優(yōu)化的條件下，310＃發(fā)酵液的殺蟲活性從原來的半致死時間為19.2min減少為13.9min，縮短了5.3min。 3．對抗生素理化性質(zhì)的研究發(fā)現(xiàn)，該物質(zhì)是一種熱穩(wěn)定性較好(經(jīng)高溫滅菌處理仍保持較高的活性)，在pH6.0-10.0比較穩(wěn)定，抗紫外線分解較好，分子量

5、<3000Da，極性較強的非脂溶性小分子物質(zhì)。 4．分離純化路線的探討：陽離子交換樹脂的分離的條件：調(diào)節(jié)樣品pH6.0-7.0，吸附流速為2.0mL/min；上樣量按樹脂/樣品=15％進行；用0.2％的NaCl溶液洗脫，洗脫速度為0.5mL/min。凝膠過濾層析的條件：上樣量為膠床體積的2％，蒸餾水洗脫，洗脫速度為0.25mL/min。 5．經(jīng)全波長掃描，確定抗生素的檢測波長為290nm：經(jīng)質(zhì)譜分析，確定活性物質(zhì)的分子量