基于DNA循環(huán)放大的腫瘤標(biāo)志物傳感分析研究.pdf

1、基于DNA循環(huán)放大的腫瘤標(biāo)志物傳感分析研究學(xué)位論文完成日期：指導(dǎo)教師簽字：2012年6月8日—萬r答辯委員會成員簽字：趔3鑫31裂基于DNA循環(huán)放大的腫瘤標(biāo)志物傳感分析研究摘要本論文的豐要內(nèi)容是將電化學(xué)分析技術(shù)、比色分析技術(shù)、化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)、納米技術(shù)、DNA雜交技術(shù)以及DNA循環(huán)放大技術(shù)相結(jié)合，研制出高靈敏度、高選擇性的新型DNA生物傳感器，對部分腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行選擇性的識別和測定，為腫瘤的臨床早期診斷提供基礎(chǔ)性研究資利二本文著重描述了

2、三種類型(I自DNA牛物傳感器的研制以及其性質(zhì)的研究：l研究了一種新穎且靈敏的1辱DNA栩判和內(nèi)切酶循環(huán)放大用于檢測日標(biāo)DNA自J電化學(xué)生物傳感器。：【作原理如下：首先，為DNA傳感器組裝過程，將DNA骨架連接在磁珠上，這樣就擴(kuò)大了量子點(diǎn)修飾的DNA掰]’著位點(diǎn)。其次，為內(nèi)切酶的循環(huán)放大過程，構(gòu)建的DNA生物傳感器經(jīng)過內(nèi)切酶的循環(huán)放大過程，進(jìn)一步提高JDNAJ芋歹0的檢測靈敏度。最后，為電化學(xué)檢測過程，加)kPbS量子點(diǎn)參與反應(yīng)，經(jīng)硝酸

3、處理過以后，Pb”的濃度變化可通過溶出伏安電流強(qiáng)度的變化來確定，由于目標(biāo)DNA的濃度與Pb2的濃度在一定范圍內(nèi)成正比關(guān)系，從而實(shí)現(xiàn)刑目標(biāo)DNAfJq檢測。在實(shí)驗(yàn)優(yōu)化級選定的最佳條件下，得到了目標(biāo)DNA自4J線性范圍為2010。o～1010?！痬ol／L，檢洲限為1210“oM。2在結(jié)合磁珠和酶循環(huán)放大的前期工作基礎(chǔ)上，我們又研究r一種結(jié)合聚合酶循環(huán)放大、熵驅(qū)動過程和適體識別手段WJATP牛物傳感器。它用了比色檢測手段對Ramos癌細(xì)胞中

4、[￥JATP含量進(jìn)行了檢測。傳感器工作原理如下：首先，構(gòu)建熵驅(qū)動循環(huán)前體物。其次，加入燃料DNA、ATP適體DNA及聚合酶，構(gòu)成了一個含有多個循環(huán)的反應(yīng)體系。最后，加入標(biāo)記了親和素的辣根過氧化物酶(HRP)，它跟含有生物素的燃料DNA結(jié)合，經(jīng)磁珠分離后，HRPp司催化OPDA—H202顯色，形成的OPDA—H202一Avidin—HRP體系，產(chǎn)生的信號用紫外分光：此度計檢測。因?yàn)樗鶞yATP的含量EEAvidin—HRP含量，即，OPDA

5、—H202顯色程度有關(guān)，并在一定范圍內(nèi)成一定比例關(guān)系，所以可用于檢測ATP含量。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，對ATP進(jìn)行了測定，檢N5EN6110。oM。并且在此基礎(chǔ)上，實(shí)現(xiàn)了癌細(xì)胞中ATP含量的檢測。3在以上兩種生物傳感器的研究基礎(chǔ)上，我們結(jié)合最新的文獻(xiàn)報道探索了一種檢測細(xì)胞的新方法，與前兩種不同的是，這種新的檢測方法的研究目的不再局限于DNA或生物大分子的識別和檢測，它的主要用途是檢測癌細(xì)胞。其檢測原理是：首先，將底物DNA、Ramos癌細(xì)胞