雞肉組織中秋水仙堿殘留ELISA檢測方法的研究.pdf

1、秋水仙堿是從歐洲百合科植物秋水仙的球莖中分離出的一種卓酚酮類生物堿。因其特殊的結構和強抗癌活性，近幾年有關秋水仙堿作用機制的研究異?；钴S。臨床上常作為痛風性關節(jié)炎急性發(fā)作和某些癌癥治療的首選藥。除此之外，秋水仙堿還廣泛應用于抗炎、抗纖維化及免疫調節(jié)等方面。因其治療量和中毒量比較接近，毒副作用較大，所以因誤食含秋水仙堿的食物或因治療劑量與中毒劑量掌握不準、交代不清藥物的用法用量等原因導致臨床上中毒或致死的現象很多。因此有必要對秋水仙堿藥物

2、殘留進行檢測方法的研究。
　　酶聯免疫分析技術（ELISA）具有前處理簡單、特異性高、分析成本低等特點，以其固有的優(yōu)勢在藥物殘留分析中顯示出遠大的應用前景。因此本研究選擇建立秋水仙堿藥物的ELISA檢測方法，為秋水仙堿藥物的殘留檢測提供了分析方法。
　　本研究采用硫酸水解反應成功地改造了秋水仙堿的分子結構，使其具有活性基團，并采用碳二亞胺（EDC）法和戊二醛（GA）法偶聯載體蛋白，成功制備了秋水仙堿的包被原和免疫原。通過對包

3、被原的篩選，選出三甲基-COL-GA-OVA作為包被原以提高檢測方法的靈敏度。通過對抗血清的抑制檢測篩選，選出三甲基-COL-EDC-BSA作為免疫原，免疫新西蘭大白兔，成功制備了抗秋水仙堿多克隆抗體，其效價達1?10000。與β-光秋水仙堿、足葉草毒素、別嘌呤醇、非布索坦的交叉反應率均小于1％，可忽略不計。
　　本研究同時建立了雞肉中秋水仙堿的ELISA檢測方法。通過對檢測條件的優(yōu)化，選擇在CB緩沖液作為包被液37℃孵育2h、5

4、%小牛血清作為封閉液37℃封閉1h、競爭反應條件4℃反應1h、濃度為1?3000的酶標二抗、pH值為7.0的PBS緩沖液、0.15mol/L的鹽離子濃度的條件下，測得抗體的IC50值約為0.54ng/mL，在0.04-8.19 ng/mL的線性范圍內，抑制率與秋水仙堿藥物濃度的對數值呈顯著的線性關系，相關系數為r=0.9989。并進行了雞肉樣品的添加回收試驗，檢測限為0.23μg/kg，回收率在74.6~83.5%之間，變異系數在6.8