嬰兒雙歧桿菌完整肽聚糖生產(chǎn)工藝及其抗腫瘤作用機理的研究.pdf

1、本課題研究了嬰兒雙歧桿菌完整肽聚糖在工業(yè)化生產(chǎn)條件下的提取工藝，并對提取的完整肽聚糖進行了質(zhì)量及其抗腫瘤作用機理的研究，為其推廣應(yīng)用提供了必要的理論依據(jù)。 采用發(fā)酵工程研究方法，對嬰兒雙歧桿菌菌株的適宜培養(yǎng)溫度、適宜培養(yǎng)基、培養(yǎng)終點、離心條件、冷凍干燥保護劑進行了研究，確定了改良的TPY培養(yǎng)基，嬰兒雙歧桿菌菌株經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)酵液活菌數(shù)可達5×109cfu/mL，凍干菌粉活菌數(shù)可達2.8×1011～3.0×1011cfu/g，其增菌效

2、果高于高密度發(fā)酵法。 根據(jù)革蘭氏陽性菌細胞壁結(jié)構(gòu)可知磷壁酸與細胞壁通透性有很大的關(guān)系，因此，首先抽提磷壁酸使細胞膜通透性增加，有利于外界物質(zhì)更好的作用于細胞和細胞內(nèi)容物質(zhì)更容易排出，然后脫掉胞膜上的脂肪類物質(zhì)，最后用復(fù)合酶酶解細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)類物質(zhì)。通過試驗確定完整肽聚糖提取工藝路線為：10％TCA在70℃攪拌1hr；用乙酸鈉、氯仿、甲醇混合液脫脂24hrs；用濃度為2000U的胰酶和堿性蛋白酶共同處理12hrs，最后通過離心清洗

3、去除雜質(zhì)。針對改良法和Sekine法所提取的完整肽聚糖做了全面的結(jié)構(gòu)和成分分析，結(jié)果表明，采用改良法所提取的完整肽聚糖其超微結(jié)構(gòu)完整，氨基己糖含量為20.04 mg/g：蛋白質(zhì)含量為339.6 mg/g；中性糖含量為500.01 mg/g；總脂含量為36.84 mg/g；磷含量為0.3 mg/g。實驗證明，與傳統(tǒng)Sekine法相比，改良法所獲得完整肽聚糖不僅品質(zhì)沒有劣化，還縮短了提取時間并節(jié)約了成本。 本試驗通過測定脾臟指數(shù)、觀