基于報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)的G蛋白偶聯(lián)受體第二信使cAMP、Ca2+檢測(cè)方法的建立.pdf_第1頁(yè)
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1、G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein-coupled receptors，GPCRs)家族參與了機(jī)體內(nèi)多種生理過(guò)程的調(diào)節(jié)，是治療多種人類疾病的主要藥物靶點(diǎn)。檢測(cè)G蛋白偶聯(lián)受體活化后第二信使cAMP和Ca2+信號(hào)可用于研究受體激動(dòng)劑活性、信號(hào)通路及受體功能研究，并應(yīng)用于G蛋白偶聯(lián)受體藥物篩選和研發(fā).本論文構(gòu)建了新型的雙反應(yīng)元件、雙報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)CRE-rLuc/NFAT-fLuc，可同時(shí)檢測(cè)胞內(nèi)cAMP和Ca2+信號(hào)變化。試驗(yàn)檢測(cè)了6個(gè)功

2、能差異(即偶聯(lián)不同亞型G蛋白)的G蛋白偶聯(lián)受體：昆蟲脂動(dòng)激素受體(AKHR)、人源大麻受體1、2(CB1、CB2)、人源組胺受體1、3(H1R、H3R)、人源煙酸受體(HM74a)、人源胰高血糖素樣肽1(GLP-1)，結(jié)果所得的已知激動(dòng)劑引起相應(yīng)受體cAMP和Ca2+的EC50與文獻(xiàn)一致，且cAMP和Ca2+信號(hào)特征與經(jīng)典胞內(nèi)cAMP和鈣流檢測(cè)法測(cè)得的結(jié)果一致，充分證明了該方法的可行性與靈敏性。應(yīng)用該檢測(cè)系統(tǒng)，初步檢測(cè)了各類抑制劑對(duì)受體

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