PAMAM樹形分子納米組裝體系在基因遞送載體中的應(yīng)用.pdf

1、聚酰胺(PAMAM)樹形分子作為納米材料中重要的一員，它有著獨(dú)特的物理化學(xué)性能，本文對(duì)PAMAM樹形分子的納米組裝體系進(jìn)行了深入的研究，并對(duì)PAMAM樹形分子納米組裝體系的生物學(xué)應(yīng)用進(jìn)行了初步的探索，本研究的主要內(nèi)容為： (1) 聚酰胺(PAMAM)樹形分子的合成與表征。 (2) PAMAM樹形分子與碳納米管(CNT)組裝體系的制備及表征。 (3) PAMAM樹形分子與金納米棒(GNR)組裝體系的制備及表征。

2、利用核磁共振氫譜(1H NMR)、傅利葉轉(zhuǎn)換紅外光譜(FT-IR)、原子力顯微鏡(AMF)、高分辨透射電子顯微鏡分析(HR-TEM)等表征手段詳細(xì)對(duì)PAMAM樹形分子及其組裝體系進(jìn)行表征。 (4) PAMAM樹形分子遞送反義核酸抑制腫瘤效果研究。 (5) PAMAM-CNT絡(luò)合物遞送反義核酸抑制腫瘤效果研究。 (6) PAMAM-GNR組裝體系遞送小干涉RNA(siRNA)抑制腫瘤效果研究。 PAMAM樹形分子

3、納米組裝體系與反義核酸形成PAMAM-asODN絡(luò)合物，與腫瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。瓊脂糖凝膠電泳分析了核酸與納米組裝體系之間的相互作用，MTT法測(cè)量了腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率，RT-PCR檢測(cè)了survivin基因的表達(dá)水平，Confocol顯微鏡表征核酸進(jìn)入細(xì)胞的情況，透射電子顯微鏡觀察納米材料在細(xì)胞中的定位。 結(jié)果表明：核磁共振氫譜(1H NMR)、傅利葉轉(zhuǎn)換紅外光譜(FT-IR)證明了PAMAM樹形分子被成功合成，表征了其結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

4、；AFM結(jié)果顯示可見PAMAM-CNT、PAMAM-GNR結(jié)合緊密；TEM顯微鏡結(jié)果顯示：PAMAM-CNT、PAMAM-GNR復(fù)合物均能高效轉(zhuǎn)染特定基因進(jìn)入細(xì)胞中，對(duì)細(xì)胞毒性很??；熒光顯微鏡照片及MTT法證實(shí)樹形分子遞送survivin反義核酸對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率隨培養(yǎng)時(shí)間、復(fù)合物濃度、樹形分子代數(shù)的增加而增加，在濃度6.0μmol/L G4.0 PAMAM-asODN與細(xì)胞培養(yǎng)96h可使抑制率最高可達(dá)55％以上；用MTT法測(cè)量結(jié)果表明

5、，與對(duì)照asODN組比，PAMAM-CNT-asODN對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制程度顯著增強(qiáng)，而且隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)、培養(yǎng)濃度的增加而增強(qiáng)；倒置顯微鏡觀察PAMAM-GNR-siRNA對(duì)胃癌MGC80-3細(xì)胞抑制效果顯著，與siRNA對(duì)照組相比，加入PAMAM-GNR-siRNA材料的細(xì)胞明顯生長(zhǎng)受抑制，部分出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。 由此可見，我們認(rèn)為，樹形分子修飾的碳納米管，金納米棒可能是一種安全、高效的基因遞送系統(tǒng)，是高效的基因遞送載體，在未