基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的中藥化學(xué)成分鑒定方法學(xué)研究.pdf

1、中藥是天然產(chǎn)物的寶庫，里面蘊(yùn)藏的秘密吸引著無數(shù)研究者前赴后繼，而九十年代后期成熟的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)可能就是打開寶庫大門的一把金鑰匙!本論文以對治療心血管疾病、抗腫瘤和抗炎效果較好的三味中藥(燈盞細(xì)辛、苦參和金果欖)為對象，采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)深入細(xì)致地分析了其中的天然活性化合物，示范了如何根據(jù)多級質(zhì)譜碎片信息確定化合物的結(jié)構(gòu)。圍繞著如何提高數(shù)據(jù)分析的智能化、簡便化，設(shè)計了多個實(shí)用的算法和工具，并初步建立了基于Web瀏覽器的天然產(chǎn)物質(zhì)譜檢

2、索系統(tǒng)，有望成為新一代天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)確證系統(tǒng)的原型。 本文主要內(nèi)容及學(xué)術(shù)貢獻(xiàn)如下： (1)建立了分析燈盞細(xì)辛和雪蓮果酚酸類成分的LC/DAD/MSn方法；根據(jù)UV光譜和多級質(zhì)譜，鑒定或推測了燈盞細(xì)辛中53個化合物，包括咖啡酰奎尼酸酯(CQAs)、CQA葡萄糖苷、丙二酸單酰CQA、乙酰CQA、咖啡酰-2,7-脫氫-3-去氧-2-辛酮糖酸衍生物(CDOAs)、咖啡酰-2,7-脫氫-2-辛酮糖酸衍生物(COAs)、黃酮、黃酮醇和

3、二氫黃酮，大部分化合物為燈盞細(xì)辛中首次報道，其中19個為新化合物。首次研究了CDOAs和COAs類化合物的裂解途徑，其MSn中的離子2,5O-，3,6O-，4,6O-是它們的特征碎片。 (2)通過從苦參中提取和合成的方法，制備得18個含異戊烯單元的二氫黃酮、二氫黃酮醇和查爾酮，詳細(xì)研究了它們在正離子和負(fù)離子模式下的ESI-MSn，再輔以高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)和模型化合物，建立了這一類化合物可能的裂解途徑。研究發(fā)現(xiàn)，黃酮B環(huán)2'-OH在分

4、子內(nèi)與1位氧原子形成分子內(nèi)氫鍵，使黃酮C環(huán)的RDA反應(yīng)極易發(fā)生，在正離子模式生成1,3A+，負(fù)離子模式生成1,4A-。此外，二氫黃酮在(+)ESI/MS2中的脫水也與2'-OH有關(guān)。甩E2消除機(jī)制成功解釋了極少見的負(fù)離子模式脫水和脫甲醇現(xiàn)象。二氫黃酮和對應(yīng)的查爾酮異構(gòu)體可通過比較(+)ESI/MS2中1,3A+和S+離子的相對豐度來區(qū)分，而它們的負(fù)離子模式多級質(zhì)譜則沒有區(qū)別。 (3)使用LC/DAD/ESI-MSn技術(shù)，建立了鑒

5、定和比較中藥金果欖的兩種基源植物青牛膽和金果欖中化學(xué)成分的方法，該方法可同時分析植物中的異喹啉生物堿、二萜內(nèi)酯和植物甾體三大類成分。正離子模式下，根據(jù)這三類成分的各自不同的特征離子可快速判斷提取物中化合物的類別：異喹啉生物堿為[M]+或[M+H]+，二萜內(nèi)酯為[M+NH4]+和/或[M+H-CO2]+，植物甾體為[M+H-nH2O]+(n=1-3)。紫外光譜也有助于化合物類別的判斷。最終，通過與標(biāo)準(zhǔn)品對照確證了11個化合物，根據(jù)MSn數(shù)

6、據(jù)推斷了另外13個化合物的結(jié)構(gòu)，其中2個為新化合物。雖然青牛膽和金果欖兩種植物中化合物的種類基本一致，但其含量差別很大，這可能會導(dǎo)致藥理活性的不同。 (4)編制了Finnigan原始raw文件的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化程序raw2txt，為后繼開發(fā)數(shù)據(jù)處理相關(guān)的算法奠定基礎(chǔ)。針對液質(zhì)聯(lián)用數(shù)據(jù)背景噪音的特點(diǎn)，設(shè)計了FMSA算法，比己報道的方法更能準(zhǔn)確區(qū)分信號與噪音。為提高全掃描質(zhì)譜中加合離子判斷的速度和準(zhǔn)確度，編寫了AddCal軟件，軟件支持用戶