HIF-1a與VEGF在小腦血管網(wǎng)織細(xì)胞瘤中的表達(dá).pdf

1、血管網(wǎng)織細(xì)胞瘤，也叫血管母細(xì)胞瘤(Hemangioblastoma，HB)，是一種起源于中胚葉殘余組織，發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，約占顱內(nèi)腫瘤的0.9％～2.1％，為良性腫瘤，一般不具有侵襲性。小腦、脊髓、腦干是其好發(fā)部位，病變位于小腦者約占95％，它常散在或伴隨VHL疾病發(fā)生。目前，手術(shù)切除是治療的主要方法。小腦HB主要由血管組成，血供非常豐富，增加了手術(shù)的風(fēng)險和死亡率，而且位置靠近腦干和第四腦室，尤其是腫瘤的部位位于手術(shù)禁區(qū)時，就不

2、能采取手術(shù)的方法，亟待一種新的治療方法。因?yàn)樾∧XHB相比于其它腦腫瘤最突出的特征就是高度血管化，所以針對小腦HB的發(fā)生和發(fā)展過程中腫瘤血管的新生的治療成為一種理想的治療方法。 缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)是近年來發(fā)現(xiàn)的在體內(nèi)缺氧條件下發(fā)揮主要調(diào)控作用的一種轉(zhuǎn)錄因子，在多種腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)。目前，已知體內(nèi)促進(jìn)血管新生最重要的因子為血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(Vascular

3、 Endothelial Growth Factor,VEGF)，它能夠直接刺激內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖，是高度特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂素，參與許多生理及病理過程，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、遷移及增加血管通透性。近年來對HIF-1α和VEGF在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中的作用成為研究的熱點(diǎn)，并且研究證明HIF-1α能夠促進(jìn)VEGF等基因的表達(dá)，使腫瘤血管出現(xiàn)增生改變，在腫瘤血管新生的過程中起核心調(diào)控作用。 目的：本文通過免疫組化法和RT-PCR

4、法對小腦HB組織中HIF-1α與VEGF基因蛋白及mRNA水平表達(dá)的檢測，探索HIF-1α與VEGF在小腦HB中的表達(dá)及相關(guān)性，為小腦HB發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 方法： 1.病例資料采集：收集2001年至2006年間，河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除，且病歷資料保存完好的小腦HB組織石蠟包埋標(biāo)本30例，且所有患者臨床資料完整，所有患者術(shù)前均未經(jīng)過放、化療。另取我院神經(jīng)外科10例后顱窩減壓術(shù)患者的正常小

5、腦組織作為對照。新鮮冷凍標(biāo)本5例，均來自2005年至2006年我院神經(jīng)外科手術(shù)過程中所取的小腦船組織，并及時經(jīng)液氮冷凍后保存于-80℃冰柜，并取1例行后顱窩減壓術(shù)患者正常小腦組織冷凍保存作為對照。 2.免疫組織化學(xué)染色法檢測小腦HB組織中HIF-1α與VEGF在蛋白水平的表達(dá)：免疫組化步驟按試劑盒說明進(jìn)行操作。判定標(biāo)準(zhǔn)：光學(xué)顯微鏡下觀察10個高倍鏡(10×40倍)視野陽性細(xì)胞所占比例，計(jì)算陽性細(xì)胞率。無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞數(shù)<1％

6、為陰性(一)，陽性細(xì)胞數(shù)1％～10％為陽性(+)，11％～50％為中度陽性(++)，>50％為強(qiáng)陽性(+++)。 3.RT-PCR法檢測小腦HB組織中HIF-1α與VEGF mRNA水平的表達(dá)：從凍存的正常小腦組織和小腦HB標(biāo)本中，用TRIzol法提取細(xì)胞總RNA，經(jīng)RT-PCR反應(yīng)，并分別對HIF-1α與VEGF目的基因片段進(jìn)行擴(kuò)增后，經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察后用LabWork系統(tǒng)對各條帶進(jìn)行掃描測定光密度值，對

7、所得半定量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：分類數(shù)據(jù)變量資料的比較采用Fisher確切概率法，相關(guān)分析采用Spearman等級相關(guān)分析。0.4≤r＜0.7表示中度相關(guān)，r≥0.7表示高度相關(guān)。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±S)表示。 結(jié)果： 1.HIF-1α蛋白在小腦HB組織中的表達(dá)情況：正常人小腦組織標(biāo)本僅見1例HIF-1α陽性表達(dá)，小腦HB中28例HIF-1α陽性表達(dá)，HIF-1α在小腦HB和正常小腦中表達(dá)的陽性的

8、率為93.3％和10％，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 2.VEGF蛋白在小腦HB組織中的表達(dá)情況：正常人小腦組織僅見1例VEGF陽性表達(dá)，小腦HB中29例VEGF陽性表達(dá)，VEGF在小腦HB和正常小腦中表達(dá)的陽性率為96.6％和10％，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 3.HIF-1αmRNA在小腦}玎B組織中的表達(dá)情況：正常人小腦組織未見HIF-1αmRNA表達(dá)，所有的小腦HB組織中都檢測到HIF-

9、1αmRNA表達(dá)。在小腦HB和正常小腦組織中表達(dá)的陽性率為100％和0％。 4.VEGF mRNA在小腦HB組織中的表達(dá)情況：正常人小腦組織未見VEGF mRNA表達(dá)，所有的小腦HB組織中都檢測到VEGF mRNA表達(dá)。在小腦HB和正常小腦組織中表達(dá)的陽性率為100％和0％。 5.小腦HB中HIF-1α與VEGF在蛋白水平的表達(dá)是正相關(guān)(r=0.903)。 結(jié)論： 1.小腦船中HIF-1α蛋白和HIF-1