VEGF,BFGF皮下局部注射影響大鼠自體顆粒脂肪移植物存活率的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、脂肪移植的開展已有一百多年的歷史。其在整形外科領(lǐng)域的地位尤顯重要。由于其來(lái)源豐富、取材容易、操作簡(jiǎn)單、充盈外形好、無(wú)排異反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn),故多用于充填顏面部的凹陷畸形、隆顳、隆鼻和隆乳等整形美容手術(shù)中。但移植脂肪的成活率較低,一般為30％~60%。主要原因是移植的脂肪組織未能及時(shí)、有效地與受區(qū)建立血供,從而導(dǎo)致移植的脂肪組織缺血、壞死及吸收。故如何加速移植體的血供建立成為當(dāng)今脂肪組織移植中研究的熱點(diǎn)。
　　目的:
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建

2、立大鼠的脂肪移植模型,在大鼠自體的脂肪顆粒中加VEGF與 bFGF的復(fù)合體。利用 VEGF與 bFGF的促進(jìn)血管生長(zhǎng),加速局部血液循環(huán)重建的作用,研究其對(duì)移植體內(nèi)早期血管生成的影響,及其對(duì)移植游離脂肪成活率的影響。
　　方法:
　　采用Wistar大鼠50只,隨機(jī)分為5組。生理鹽水對(duì)照組10只,第二實(shí)驗(yàn)組VEGF組10只,第三實(shí)驗(yàn)組bFGF組10只,第四實(shí)驗(yàn)組VEGF、bFGF聯(lián)合處理組10只,(與空白組和VEGF、bFGF

3、聯(lián)合處理組相對(duì)比)加了另一對(duì)照組即小劑量VEGF+bFGF聯(lián)合處理10只。取出腹部大網(wǎng)膜脂肪總量約2.0g,脂肪塊用顯微剪剪碎成細(xì)小顆粒狀,約1-2mm,用20ml注射器洗凈,其他組游離脂肪制備同上。翻轉(zhuǎn)大鼠,在背部作一皮膚縱行小切口,將脂肪顆粒注射到已背部腔隙內(nèi),縫合背部切口。五組中在每組中分別隨機(jī)抽取均5只 wistar大鼠,于術(shù)后15、30天取材?？梢娭疽浦搀w呈暗黃色,被一層纖維組織包膜包繞,界線明顯。去除移植體的外周包膜后,將

4、取出的脂肪移植體放入精密測(cè)量天平秤移植體的重量,讀取并記錄數(shù)據(jù)。10%甲醛固定后進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋,切片,做CD34免疫組化染色備用。
　　結(jié)果:
　　1.對(duì)比 VEGF+ bFGF(各0.1μg)的脂肪顆粒移植組和各對(duì)照組殘余重量:
　　15天移植物殘余矯正重量統(tǒng)計(jì)分析,t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較.實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組比較P<0.05,兩組間有明顯差異。實(shí)驗(yàn)組與 VEGF組比較F=2.25, P=0.03,P<0.05,兩組間有

5、明顯差異。實(shí)驗(yàn)組與 bFGF組比較F=1.68, P=0.03,P<0.05,兩組間有明顯差異。bFGF與VEGF組比較F=1.23, P=0.86,P>0.05,兩組間無(wú)明顯差異。bFGF與VEGF組較其他組有明顯的脂肪成活。
　　30天移植物殘余矯正重量統(tǒng)計(jì)分析,實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組比較P<0.05,兩組間有明顯差異。實(shí)驗(yàn)組與 VEGF組比較F=1.12, P=0.03, P<0.05,兩組間有明顯差異。實(shí)驗(yàn)組與 bFGF組比較

6、F=2.85, P=0.04, P<0.05,兩組間有明顯差異。bFGF與VEGF組比較F=2.54, P=0.56, P>0.05,兩組間無(wú)明顯差異。bFGF與VEGF組較其他組有明顯的脂肪成活。
　　2.VEGF+bFGF(各0.1μg)的脂肪顆粒移植組和各對(duì)照組的CD34(×400)染色對(duì)比:
　　脂肪移植后30天的CD34染色,VEGF+bFGF(各0.1μg)處理的脂肪顆粒移植組(圖12)和對(duì)照組(圖9)之間的染色

7、血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)有明顯差異, VEGF+ bFGF(各0.1μg)處理的脂肪顆粒移植組(圖12)陽(yáng)性染色較多,而VEGF+bFGF(各0.1μg)處理的脂肪顆粒移植組(圖21)較VEGF+bFGF(各0.05μg)處理的脂肪顆粒移植組(圖22)陽(yáng)性染色數(shù)略高。
　　3. VEGF+bFGF(各0.1μg)的脂肪顆粒移植組和各對(duì)照組的CD34(×400)染色平均微血管密度的對(duì)比:
　　30天移植物微血管計(jì)數(shù)分析,實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照

8、組比較F=1.16,P<0.05,兩組間有明顯差異。實(shí)驗(yàn)組與VEGF組比較F=2.18, P<0.05,兩組間有明顯差異。實(shí)驗(yàn)組與bFGF組比較F=2.47,P<0.05,兩組間有明顯差異。bFGF與VEGF組比較F=1.13, P=0.81,P>0.05,兩組間無(wú)明顯差異。
　　4.不同VEGF+ bFGF劑量的脂肪顆粒移植后殘余重量的對(duì)比:
　　15天移植物殘余矯正重量統(tǒng)計(jì)分析,t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較.兩組與空白對(duì)照組比較P

9、<0.05,兩組間有明顯差異。小劑量組與空白組比較P<0.05,兩組間有明顯差異。大劑量組與空白組比較 P<0.05,兩組間有明顯差異小劑量組與大劑量組比較P<0.05,兩組間有明顯差異。
　　30天移植物殘余矯正重量統(tǒng)計(jì)分析,兩組與空白對(duì)照組比較P<0.05,兩組間有明顯差異。小劑量組與空白組比較 P<0.05,兩組間有明顯差異。大劑量組與空白組比較 P<0.05,兩組間有明顯差異小劑量組與大劑量組比較P<0.05,兩組間有明顯

10、差異。
　　5.不同劑量VEGF+ bFGF脂肪顆粒移植組的CD34(×400)染色平均微血管密度的關(guān)系:
　　30天移植物微血管計(jì)數(shù)分析,小劑量組和大劑量組與空白對(duì)照組比較P<0.05,兩組間有明顯差異。大劑量組與小劑量組比較 P<0.05,兩組間有明顯差異。
　　結(jié)論:
　　(1)建立有效的新生血管模型,新鮮分離的間質(zhì)血管可有效的誘導(dǎo)新生血管的形成。大網(wǎng)膜作為脂肪移植的來(lái)源,是因?yàn)榇缶W(wǎng)膜有密集毛細(xì)血管的構(gòu)筑,

11、能改善缺血器官的血液供應(yīng),能在兩種結(jié)構(gòu)之間迅速發(fā)生血管連接,德國(guó)Liebermann Meffert認(rèn)為大網(wǎng)膜與脾同起源于胃后壁的同一區(qū)域,它們都具有吞噬作用和新生毛細(xì)血管形成的機(jī)能。在臨床應(yīng)用的前瞻性上,隨著微創(chuàng)技術(shù)的發(fā)展,為人體脂肪填充在臨床的應(yīng)用提供了很好的思路。
　　(2)對(duì)自身脂肪移植血管生物學(xué)研究表明,一些細(xì)胞因子在改善缺血組織存活率方面扮演了重要的角色,其中VEGF是強(qiáng)有力的直接血管誘導(dǎo)因子,為血管生成初期最重要的促

12、進(jìn)因子,具高度保守性,刺激體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移,誘導(dǎo)體內(nèi)血管形成,維護(hù)血管正常狀態(tài),增加血管內(nèi)皮的通透性,在新生血管形成過(guò)程中起重要作用。而bFGF可以彌補(bǔ)VEGF這方面的不足,它可以促進(jìn)構(gòu)成血管的主要成分細(xì)胞如成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等增值,而且達(dá)到協(xié)調(diào)生長(zhǎng)的效果。本實(shí)驗(yàn)利用具有廣泛前景的脂肪移植實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?聯(lián)合應(yīng)用VEGF與bFGF來(lái)研究脂肪組織的血運(yùn)重建,目的在于探索一種新的提高移植脂肪組織存活率的新方法。VEGF與b