脾臟巨噬細(xì)胞的極化在大鼠熱射病模型中的研究.pdf

1、目的：
　　通過學(xué)習(xí)、借鑒國內(nèi)外學(xué)者對熱射病動物模型的研究，結(jié)合本課題所能提供的實(shí)驗條件及技術(shù)水平構(gòu)建符合本實(shí)驗要求的大鼠熱射病模型。在熱射病的病生機(jī)制研究中，內(nèi)環(huán)境的炎性細(xì)胞因子的擴(kuò)大反應(yīng)占有較大的地位，巨噬細(xì)胞作為機(jī)體內(nèi)免疫細(xì)胞的一種，介導(dǎo)著體內(nèi)的炎性反應(yīng)過程，通過分離、培養(yǎng)巨噬細(xì)胞，研究與其極化有關(guān)的iNOS、ArgⅠ兩種因子在熱應(yīng)激處理后不同時間點(diǎn)的變化，進(jìn)一步揭示巨噬細(xì)胞極化與熱射病大鼠兩者之間的關(guān)系，為臨床治療熱射病提

2、供新的靶點(diǎn)。
　　方法：
　　經(jīng)改良處理的可控式恒溫箱控制熱暴露環(huán)境的溫度、濕度、暴露的時間，借鑒國內(nèi)外學(xué)者熱射病動物模型的研究進(jìn)展，采用溫度為40℃，濕度為60％的熱暴露處理，達(dá)到熱射病動物模型的診斷標(biāo)準(zhǔn)。通過采用實(shí)時定量PCR、Western Blot兩種實(shí)驗方法檢測熱處理即刻、1天、2天、3天、7天和對照組共6個點(diǎn)的大鼠脾臟巨噬細(xì)胞細(xì)胞表面標(biāo)志物(iNOS、ArgⅠ)表達(dá)量的變化，來判定熱應(yīng)激發(fā)生后不同時間點(diǎn)巨噬細(xì)胞的

3、極化方向。
　　結(jié)果：
　　將大鼠放置于溫度為40℃、濕度60％的熱應(yīng)激環(huán)境中處理后，構(gòu)建成功的符合本課題要求的大鼠熱射病模型。無菌操作取大鼠脾臟組織，經(jīng)分離、純化等無菌操作后獲得數(shù)量較多的合格的大鼠脾臟巨噬細(xì)胞。實(shí)時定量PCR、Western Blot兩種實(shí)驗方法檢測熱處理后各時間點(diǎn)的實(shí)驗指標(biāo)與對照組相比，iNOS除7天組無意義(P＞0.05)，余各組與對照組比有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05），但測得結(jié)果均小于對照組，表示實(shí)驗

4、組未出現(xiàn)M1型巨噬細(xì)胞極化。ArgⅠ在各點(diǎn)的數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05），在1天組ArgⅠ的含量逐漸升高，且高于同組iNOS表達(dá)量，提示在1天組后細(xì)胞向M2型方向轉(zhuǎn)變，起到保護(hù)機(jī)體的作用。
　　結(jié)論：
　　在熱射病的病理生理學(xué)變化的研究中，體溫調(diào)節(jié)中樞-下丘腦的功能紊亂、機(jī)體外熱環(huán)境對細(xì)胞的直接熱損傷作用、脂質(zhì)氧化應(yīng)激反應(yīng)、內(nèi)環(huán)境炎性細(xì)胞因子擴(kuò)大級聯(lián)反應(yīng)等都參與其中。其中炎性反應(yīng)在熱射病的病理機(jī)制中發(fā)揮重大的作用，巨噬細(xì)