巨噬細(xì)胞極化在鈣化性主動脈瓣中的表達(dá)及作用研究.pdf

1、背景和目的：鈣化性主動脈瓣疾病是全世界范圍內(nèi)發(fā)病率最高的心臟瓣膜疾病之一。而隨著老齡化社會的來臨，這一數(shù)字仍將不斷增加，造成極大的社會醫(yī)療負(fù)擔(dān)。目前對于該病，除了手術(shù)治療，尚無有效的藥物可用于延緩疾病的進(jìn)展。事實上大量的研究提示主動脈瓣鈣化的病變過程類似于動脈粥樣硬化，包括脂質(zhì)沉積、炎癥浸潤、瓣膜血管新生和纖維化重塑，最終導(dǎo)致鈣化。而在這些過程中，炎癥浸潤是其中關(guān)鍵因素之一，伴隨主動脈瓣瓣膜鈣化的整個過程。巨噬細(xì)胞作為瓣膜炎癥浸潤的主要

2、炎癥細(xì)胞無疑起著至關(guān)重要的作用。近年來發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞并非單一性狀的炎癥細(xì)胞，而是可以通過極化分化為不同亞型。大量研究認(rèn)為巨噬細(xì)胞極化在冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，而關(guān)于巨噬細(xì)胞極化在主動脈瓣鈣化中的作用目前尚未明確。因此本研究旨在通過對巨噬細(xì)胞極化在鈣化主動脈瓣中的表達(dá)以及其對瓣膜間質(zhì)細(xì)胞的影響等相關(guān)研究，來探討巨噬細(xì)胞極化在主動脈瓣鈣化中的作用機制。
　　方法：按一定納入排除標(biāo)準(zhǔn)收集臨床上行主動脈瓣置換手術(shù)的主動脈

3、瓣瓣膜標(biāo)本。首先通過比較硝酸、甲酸以及EDTA三種實驗室常用脫鈣液對鈣化性主動脈瓣脫鈣后H&E和免疫組化染色效果，篩選出合適的鈣化性主動脈瓣瓣膜脫鈣液。對收集的鈣化性主動脈瓣瓣膜進(jìn)行脫鈣處理后，采用免疫組化的方法來探測巨噬細(xì)胞極化后的不同亞型在鈣化性主動脈瓣中的分布，得出其中主要的巨噬細(xì)胞分化后亞型。然后通過體外培養(yǎng)人主動脈瓣VICs，用不同亞型巨噬細(xì)胞來進(jìn)行相應(yīng)刺激，分別在蛋白水平、基因表達(dá)水平、形態(tài)學(xué)等方面來檢測刺激后VICs的成骨

4、鈣化情況，以比較不同亞型巨噬細(xì)胞對VICs的成骨鈣化作用。
　　結(jié)果：在脫鈣效果的比較上面，EDTA組盡管脫鈣速度較慢，但其脫鈣效果最好。通過EDTA對鈣化主動脈瓣瓣膜脫鈣后進(jìn)行免疫組化發(fā)現(xiàn)：相比較正常主動脈瓣，鈣化主動脈瓣中巨噬細(xì)胞呈大量表達(dá)，其中尤其以M1型巨噬細(xì)胞表達(dá)增加明顯。而通過不同亞型巨噬細(xì)胞體外刺激VICs發(fā)現(xiàn)M1型巨噬細(xì)胞刺激后的VICs無論是在堿性磷酸酶活性水平，還是在成骨鈣化相關(guān)基因ALP、BMP2、RUNX2

5、的表達(dá)水平均增加最明顯。而在后續(xù)VICs的茜素紅染色中，更是發(fā)現(xiàn)相比于對照組和其他巨噬細(xì)胞亞型刺激組，M1型巨噬細(xì)胞刺激組陽性染色最明顯。
　　結(jié)論：本次研究結(jié)果提示，EDTA對于鈣化性主動脈瓣的脫鈣效果最好。相比其他亞型巨噬細(xì)胞，M1型巨噬細(xì)胞在鈣化性主動脈瓣中呈高表達(dá)，并且能在體外誘導(dǎo)VICs向成骨鈣化方向分化。本研究證實巨噬細(xì)胞極化后的M1型巨噬細(xì)胞在鈣化性主動脈瓣的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。而關(guān)于鈣化性主動脈瓣中巨噬細(xì)胞如