巨噬細(xì)胞極化在鈣化性主動(dòng)脈瓣中的表達(dá)及作用研究.pdf

1、背景和目的：鈣化性主動(dòng)脈瓣疾病是全世界范圍內(nèi)發(fā)病率最高的心臟瓣膜疾病之一。而隨著老齡化社會(huì)的來(lái)臨，這一數(shù)字仍將不斷增加，造成極大的社會(huì)醫(yī)療負(fù)擔(dān)。目前對(duì)于該病，除了手術(shù)治療，尚無(wú)有效的藥物可用于延緩疾病的進(jìn)展。事實(shí)上大量的研究提示主動(dòng)脈瓣鈣化的病變過(guò)程類(lèi)似于動(dòng)脈粥樣硬化，包括脂質(zhì)沉積、炎癥浸潤(rùn)、瓣膜血管新生和纖維化重塑，最終導(dǎo)致鈣化。而在這些過(guò)程中，炎癥浸潤(rùn)是其中關(guān)鍵因素之一，伴隨主動(dòng)脈瓣瓣膜鈣化的整個(gè)過(guò)程。巨噬細(xì)胞作為瓣膜炎癥浸潤(rùn)的主要

2、炎癥細(xì)胞無(wú)疑起著至關(guān)重要的作用。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞并非單一性狀的炎癥細(xì)胞，而是可以通過(guò)極化分化為不同亞型。大量研究認(rèn)為巨噬細(xì)胞極化在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，而關(guān)于巨噬細(xì)胞極化在主動(dòng)脈瓣鈣化中的作用目前尚未明確。因此本研究旨在通過(guò)對(duì)巨噬細(xì)胞極化在鈣化主動(dòng)脈瓣中的表達(dá)以及其對(duì)瓣膜間質(zhì)細(xì)胞的影響等相關(guān)研究，來(lái)探討巨噬細(xì)胞極化在主動(dòng)脈瓣鈣化中的作用機(jī)制。
　　方法：按一定納入排除標(biāo)準(zhǔn)收集臨床上行主動(dòng)脈瓣置換手術(shù)的主動(dòng)脈

3、瓣瓣膜標(biāo)本。首先通過(guò)比較硝酸、甲酸以及EDTA三種實(shí)驗(yàn)室常用脫鈣液對(duì)鈣化性主動(dòng)脈瓣脫鈣后H&E和免疫組化染色效果，篩選出合適的鈣化性主動(dòng)脈瓣瓣膜脫鈣液。對(duì)收集的鈣化性主動(dòng)脈瓣瓣膜進(jìn)行脫鈣處理后，采用免疫組化的方法來(lái)探測(cè)巨噬細(xì)胞極化后的不同亞型在鈣化性主動(dòng)脈瓣中的分布，得出其中主要的巨噬細(xì)胞分化后亞型。然后通過(guò)體外培養(yǎng)人主動(dòng)脈瓣VICs，用不同亞型巨噬細(xì)胞來(lái)進(jìn)行相應(yīng)刺激，分別在蛋白水平、基因表達(dá)水平、形態(tài)學(xué)等方面來(lái)檢測(cè)刺激后VICs的成骨

4、鈣化情況，以比較不同亞型巨噬細(xì)胞對(duì)VICs的成骨鈣化作用。
　　結(jié)果：在脫鈣效果的比較上面，EDTA組盡管脫鈣速度較慢，但其脫鈣效果最好。通過(guò)EDTA對(duì)鈣化主動(dòng)脈瓣瓣膜脫鈣后進(jìn)行免疫組化發(fā)現(xiàn)：相比較正常主動(dòng)脈瓣，鈣化主動(dòng)脈瓣中巨噬細(xì)胞呈大量表達(dá)，其中尤其以M1型巨噬細(xì)胞表達(dá)增加明顯。而通過(guò)不同亞型巨噬細(xì)胞體外刺激VICs發(fā)現(xiàn)M1型巨噬細(xì)胞刺激后的VICs無(wú)論是在堿性磷酸酶活性水平，還是在成骨鈣化相關(guān)基因ALP、BMP2、RUNX2

5、的表達(dá)水平均增加最明顯。而在后續(xù)VICs的茜素紅染色中，更是發(fā)現(xiàn)相比于對(duì)照組和其他巨噬細(xì)胞亞型刺激組，M1型巨噬細(xì)胞刺激組陽(yáng)性染色最明顯。
　　結(jié)論：本次研究結(jié)果提示，EDTA對(duì)于鈣化性主動(dòng)脈瓣的脫鈣效果最好。相比其他亞型巨噬細(xì)胞，M1型巨噬細(xì)胞在鈣化性主動(dòng)脈瓣中呈高表達(dá)，并且能在體外誘導(dǎo)VICs向成骨鈣化方向分化。本研究證實(shí)巨噬細(xì)胞極化后的M1型巨噬細(xì)胞在鈣化性主動(dòng)脈瓣的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。而關(guān)于鈣化性主動(dòng)脈瓣中巨噬細(xì)胞如