手掌參提取物對染矽塵大鼠白介素-18及ERK、JNK影響的研究.pdf

1、目的：建立染矽肺大鼠動物模型，并采用手掌參醇提取物進(jìn)行干預(yù)，觀察染矽塵大鼠血清中白細(xì)胞介素-18(IL-18)的水平及肺組織中IL-18、白介素18受體(IL-18R)、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK) c-jun 氨基末端激酶(JNK)蛋白的表達(dá)，探討IL-18、ERK、JNK在矽肺肺纖維化中的作用及手掌參提取物抗肺纖維化可能作用機(jī)制，為手掌參的藥理作用和臨床運用提供理論依據(jù)。 方法：將Wistar大鼠隨機(jī)分為4組，即對照組(co

2、ntrol，CL組)、染矽塵組(silica-instilled，SA組)、手掌參干預(yù)組(Gymnadenia conopsea Extract-treated，GcE組)和漢防己組(Tetrandrine-treated，TT組)。氣管暴露法建立大鼠矽肺模型。模型建后24h，手掌參組每日給予手掌參醇提取物(10g/kg)灌胃，漢防己組隔日給予漢防己甲素溶液(50mg/kg)灌胃，對照組和染矽塵組則給予等量溶媒的蒸餾水每日灌胃。于7d、

3、14d、21d、 28d和60d 5個時間點每組分別取8只大鼠將其處死。HE染色觀察大鼠肺組織形態(tài)學(xué)的變化。組織芯片儀制作肺組織芯片微陣列，采用免疫組化的方法檢測IL-18、ERK 1/2、JNK1/2在肺組織中的表達(dá)。免疫印跡(Western blot)蛋白定量方法分析IL-18R、ERK1/2、JNK1/2在肺組織中的表達(dá)。天狼猩紅染色法結(jié)合偏振光顯微鏡觀察肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原合成。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清IL-18水平

4、。用Image-Pro Plus Version 4.5 for windows TM 圖象分析系統(tǒng)對圖像進(jìn)行分析。用Image-Pro Plus Version 4.5 for windows TM 圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析。所有數(shù)值均用x±s表示，不同組間的比較用單因素方差分析的LSD法，全部數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理均采用SPSS 11.5 for windows分析軟件。 結(jié)果： 1、肺組織HE染色證實氣管暴露注入二氧化硅粉

5、塵懸液成功建立矽肺大鼠模型。 2、染矽塵組大鼠各時間點肺臟器系數(shù)均高于對照組，在14d、21 d、28d、60d有顯著性差異(P<0.01)。與染矽塵組比較，GcAE組肺組織臟器系數(shù)在14d、21d、28d、60d時顯著降低(P<0.05)，TT組在14d、28d、60d時顯著降低(P<0.05)。 3、手掌參對染矽塵大鼠BALF各種細(xì)胞類型數(shù)量的影響。與對照組比較，染矽塵組、手掌參組和漢防己組相應(yīng)時間點BALF白細(xì)胞總

6、數(shù)均不同程度增高，都具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)；與染矽塵組比較，手掌參組和漢防己組各相應(yīng)時間點BALF白細(xì)胞總數(shù)均小于染矽塵組，差異有顯著性(P<0.01)。與對照組比較，染矽塵組各時間點BALF中性粒細(xì)胞數(shù)均高于對照組(P<0.01)；與染矽塵組比較，除7d、14dBALF中性粒細(xì)胞數(shù)高于染矽塵組以外，其他時間點手掌參組和漢防己組BALF中性粒細(xì)胞數(shù)均減少，差異有顯著性(P<0.05，P<0.01)。與對照組相比，染

7、矽塵組各時間點BALF單核巨噬細(xì)胞均高于對照組，差異有顯著性(P<0.01)，手掌參組與染矽塵組相比，除28d、60d外，其他時間點的單核巨噬細(xì)胞數(shù)均減少(P<0.05)。與對照組比較，染矽塵組相應(yīng)時間點BALF淋巴細(xì)胞均不同程度增高，差異有顯著性(P<0.05)，60d時達(dá)高峰；與染矽塵組比較，除7d、14d BALF中性粒細(xì)胞數(shù)高于染矽塵組以外，手掌參組和漢防己組其它各時間點BALF淋巴細(xì)胞數(shù)低于染矽塵組，差異有顯著性(P<0.05

8、)。 4、手掌參對染矽塵大鼠Ⅰ、Ⅲ膠原合成的影響。與對照組比較，染矽塵組、手掌參組和漢防己組各時間I膠原均高于對照組，差異有顯著性(P<0.01)；與染矽塵組比較，手掌參組和漢防己組各時間點Ⅰ膠原低于染矽塵組組，差異有顯著性(P<0.01)。與對照組比較，染矽塵組各時間點Ⅲ膠原都高于對照組(P<0.01)；與染矽塵組比較，手掌參組和漢防己組各時間點Ⅲ膠原均低于染矽塵組，14d、21d差異有顯著性(P<0.05， P<0.01)。

9、 5、手掌參對染矽塵大鼠血清中IL-18的檢測結(jié)果顯示：與對照組比較，染矽塵組、GcAE組及TT組血清IL-18水平各時間點均有升高，都于第7d達(dá)到峰值，此后逐漸降低，其中第7d、14d、21d和28d差異有顯著性(P<0.01；P<0.05)；與染矽塵組比較，GcAE組及TT組各時間點血清IL-18含量水平均較低，其中第7d、14d、21d差異有顯著性(P<0.05)。 6、染矽塵大鼠不同時間點肺組織IL-18表達(dá)情況

10、：與對照組比較，染矽塵組、手掌參組和漢防己組各時間點肺組織IL-18的積分光密度均高于對照組，差異有顯著性(P<0.01)，其表達(dá)高峰在染矽塵后的第7d;與染矽塵組比較，手掌參組和漢防己組各時間點肺組織IL-18的積分光密度低于染矽塵組，有顯著性差異(P<0.05)。提示，矽塵能夠誘導(dǎo)大鼠肺組織IL-18表達(dá)增加，手掌參提取物對這種增加有抑制作用。 7、染矽塵大鼠不同時間點肺組織ERK表達(dá)情況：與對照組比較，染矽塵組、手掌參組和

11、漢防己組各時間點肺組織ERK的積分光密度均高于對照組，有顯著性差異(P<0.05)，表達(dá)高峰在7d；與染矽塵組比較，手掌參組和漢防己組各時間點肺組織ERK的積分光密度均低于染矽塵組，有顯著性差異(P<0.05)。可見，矽塵能夠誘導(dǎo)大鼠肺組織ERK的表達(dá)增加，手掌參醇提取物對這種增加有抑制作用。 8、染矽塵大鼠不同時間點肺組織JNK表達(dá)情況：與對照組比較，除第60d外，染矽塵組、手掌參組和漢防己組各時間點肺組織JNK的積分光密度均

12、高于對照組，差異有顯著性(P<0.01)，表達(dá)高峰在7d；與染矽塵組比較，手掌參組和漢防己組各時間點肺組織JNK的積分光密度均低于染矽塵組，第7d、14d和21d差異有顯著性(P<0.05)?？梢?，矽塵能夠誘導(dǎo)大鼠肺組織JNK的表達(dá)增加，手掌參提取物對這種增加有抑制作用。 9、染矽塵大鼠不同時間點肺組織IL-18R免疫印跡(western blotting)檢測結(jié)果：通過測定條帶的光密度對各條帶中IL-18R含量進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)：染

13、矽塵組、手掌參組、漢防己組大鼠肺組織的IL-18R蛋白含量明顯高于對照組，各組與對照組比較，均具有統(tǒng)計學(xué)意義增高(P<0.01，P<0.05)；染矽塵組的蛋白含量在各時段有所波動，染矽塵組在第7d時IL-18R蛋白含量最高，而后隨著時間的延長，IL-18R蛋白含量逐漸減少，但仍高于手掌參組和漢防己組(P<0.05)。 10、染矽塵大鼠不同時間點肺組織ERK免疫印跡(western blotting)檢測結(jié)果：通過測定條帶的光密度

14、對各條帶中ERK含量進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)：染矽塵組、手掌參組、漢防己組大鼠肺組織的ERK蛋白含量明顯高于對照組，各組與對照組比較，均具有統(tǒng)計學(xué)意義增高(P<0.01，P<0.05)；染矽塵組在第7d時ERK2蛋白含量最高，而后隨著時間的延長，ERK蛋白含量逐漸減少，除第60天外，其它各組仍高于手掌參組和漢防己組(P<0.05)。 11、染矽塵大鼠不同時間點肺組織JNK免疫印跡(western blotting)檢測結(jié)果：通過測定條帶的光

15、密度對各條帶中JNK含量進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)：染矽塵組、手掌參組、漢防己組大鼠肺組織的JNK蛋白含量明顯高于對照組，各組與對照組比較，均具有統(tǒng)計學(xué)意義增高(P<0.0 1，P<0.05)；染矽塵組在第7d時JNK蛋白含量最高，而后隨著時間的延長，JNK蛋白含量逐漸減少，除第60天外，其它各組仍高于手掌參組和漢防己組(P<0.05)。 結(jié)論： 1、大鼠支氣管內(nèi)滴入矽塵可引起大鼠肺組織炎性和纖維化性病理變化，并有矽結(jié)節(jié)形成。

16、 2、手掌參醇提物可以抑制矽塵誘導(dǎo)的大鼠肺臟器系數(shù)的增加。 3、手掌參醇提物對矽塵誘導(dǎo)的大鼠BALF細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的顯著增加有抑制作用。 4.手掌參可以抑制矽塵誘導(dǎo)的肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成。 5、染矽塵組大鼠血清IL-18水平升高，肺組織各時間點IL-18、IL-18R、 ERK1/2、JNK1/2的表達(dá)增強，均有可能參與了早期的肺損傷和纖維化的形成。 6、手掌參醇提物能夠抑制