同型半胱氨酸誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞凋亡及核因子-κB表達(dá)的研究.pdf

1、背景
　　 同型半胱氨酸（HCY）是一種含巰基氨基酸，現(xiàn)有臨床資料表明血漿同型半胱氨酸水平升高已被證明是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，但致病機(jī)制尚未完全明了。國(guó)內(nèi)外尚未有HHCY導(dǎo)致冠心病心衰的研究報(bào)道，且導(dǎo)致心衰的發(fā)生機(jī)制尚未明確。核因子-KB（NF-KB）是調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的重要因子，近來的研究表明NF-KB在心衰的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用，是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。本研究通過給予Wistar大鼠低、中、高劑量HCY誘導(dǎo)飲食12周后，建立冠心

2、病心力衰竭模型動(dòng)物模型，光鏡下觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化，用Tunel染色觀察心肌細(xì)胞凋亡情況。行EMSA測(cè)量心肌組織中的NF-KB，觀察高同型半胱氨酸血癥與心衰的相關(guān)性，NF-KB在心衰中的表達(dá)。
　　 材料和方法
　　 成年健康Wistar大鼠60只隨機(jī)分為三組，分別給予低、中、高劑量HCY誘導(dǎo)飲食約12周形成不同水平的HHCY。
　　 1.實(shí)驗(yàn)過程中觀察大鼠的精神、活動(dòng)、進(jìn)食、毛色等情況。
　　 2.心

3、肌組織形態(tài)學(xué)檢查：取左室心肌適量大小，常規(guī)固定、包埋、HE染色后行光鏡觀察。
　　 3.心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（apoptotoc index，AI）：于左心室心尖部固定部位取適量全層心肌組織，按常規(guī)病理組織學(xué)方法制備心肌石蠟標(biāo)本，采用脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（TUNEL法）檢測(cè)凋亡心肌細(xì)胞。具體按照原位凋亡檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作。細(xì)胞核呈棕黃色或者棕褐色顆粒特征，判定為凋亡細(xì)胞。光鏡下根據(jù)凋亡陽性細(xì)胞分布情況，每

4、張切片拍攝5個(gè)陽性視野，以陽性細(xì)胞數(shù)所占觀察心肌細(xì)胞的比例作為凋亡率，即心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（％）=（凋亡心肌細(xì)胞核數(shù)/正常心肌細(xì)胞核數(shù)）×100％。計(jì)算心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。
　　 4.從心肌組織中提取核蛋白（具體按照細(xì)胞核蛋白提取試劑盒的說明書進(jìn)行操作）。應(yīng)用EMSA測(cè)量心肌組織NF-κB的活性（具體步驟按照凝膠遷移率分析試劑盒說明進(jìn)行操作）：①制備聚丙烯酰胺膠和預(yù)電泳。②制備結(jié)合反應(yīng)液。③加樣后

5、電泳。④電泳轉(zhuǎn)移反應(yīng)體系到尼龍膜。⑤交聯(lián)固定DNA。⑥通過化學(xué)發(fā)光反應(yīng)檢測(cè)生物素標(biāo)記DNA。⑦曝光成像。計(jì)算其條帶灰度值，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.12周之后，大鼠心力衰竭模型成功建立。
　　 2.光鏡下形態(tài)學(xué)變化：與對(duì)照組相比，模型組心肌損傷程度明顯加重。高劑量組破壞程度比低劑量組嚴(yán)重。其中低、中劑量組具有相似的形態(tài)學(xué)變化。
　　 3.與對(duì)照組相比（2.90±0.89

6、％），模型組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯增高（P<0.01），高劑量組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（14.17±2.73％）明顯高于中劑量組（8.70±1.92％）（P<0.01），低劑量組（7.35±1.26％）和中劑量組（8.70±1.92％）之間無明顯差別（P=0.139）。
　　 4.與對(duì)照組（條帶灰度值為272.64±26.51）相比，模型組NF-κB的活性明顯增高（P<0.01）。在模型組中，NF-κB的活性為高劑量組（條帶灰度值為78

7、0.07±45.34）明顯高于中劑量組（條帶灰度值為617.61±45.63）（P<0.01），中劑量組（條帶灰度值為617.61±45.63）明顯高于低劑量組（條帶灰度值為485.00±36.07）（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1.同型半胱氨酸能誘導(dǎo)大鼠心衰，并且心衰的嚴(yán)重程度與喂養(yǎng)大鼠的同型半胱氨酸的劑量密切相關(guān)。
　　 2.心衰組大鼠的NF-κB活性明顯增高，心衰的嚴(yán)重程度與NF-κB活性密切相關(guān)