中藥材及其制劑中馬兜鈴酸含量測(cè)定方法的研究.pdf

1、中草藥在我國(guó)已歷經(jīng)數(shù)千年，經(jīng)過我們祖先祖祖輩輩的長(zhǎng)期使用被證明是有效的，從而形成了燦爛的中醫(yī)藥文化。但中草藥至今無(wú)法成為世界普遍認(rèn)可的藥物，其主要原因在于成分過于復(fù)雜，大部分無(wú)法闡明其確切的有效成分和藥理作用，有的無(wú)穩(wěn)定可靠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可循。近年來(lái)，馬兜鈴酸的致瘍作用和由馬兜鈴酸導(dǎo)致的腎病引起國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注，使部分中草藥和中成藥在國(guó)外遭到禁用，中藥國(guó)際化進(jìn)程受到巨大影響。 含馬兜鈴酸的中藥材中大部分已有馬兜鈴酸含量測(cè)定方法的文獻(xiàn)

2、報(bào)道，但一般是一種含測(cè)方法針對(duì)一種藥材，缺乏比較系統(tǒng)的研究。為了更好的控制含馬兜鈴酸藥材及其制劑中馬兜鈴酸的含量，需要建立一種準(zhǔn)確可靠，簡(jiǎn)便易行，適用于多數(shù)中藥材及其制劑中馬兜鈴酸含量測(cè)定的方法。本論文參考以往的文獻(xiàn)，建立了一種適用性較廣的馬兜鈴酸檢測(cè)方法。目前文獻(xiàn)中馬兜鈴酸的含量測(cè)定方法主要有： TLCS、HPLC、LC-MS等。其中HPIC應(yīng)用的最多，對(duì)照多選用馬兜鈴酸Ⅰ(A)、馬兜鈴酸Ⅱ(B)。本課題分別對(duì)TLCS、HPL

3、C的最低檢測(cè)限進(jìn)行考察，結(jié)果表明，HPLC法的檢測(cè)限大大低于TLCS法的檢測(cè)限，考慮到樣品中馬兜鈴酸的含量差異大，部分樣品含量較低，所以在本課題中，重點(diǎn)對(duì)HPLC法測(cè)定馬兜鈴酸A含量進(jìn)行系統(tǒng)的研究。本文對(duì)馬兜鈴酸含量測(cè)定的方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，對(duì)提取溶劑、提取方法、提取時(shí)間進(jìn)行了考察，選擇甲醇．甲酸(98:2)為提取溶劑，采用加熱回流2小時(shí)的方法進(jìn)行提取。通過馬兜鈴酸Ⅰ、馬兜鈴酸Ⅱ的分離度，理論塔板數(shù)確定選用的流動(dòng)相為乙腈-0.3％碳酸

4、銨溶液(用稀鹽酸調(diào)pH值7.5)(25:75)，確定檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm。 方法學(xué)研究中，按照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄新增的“中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”，首先對(duì)馬兜鈴酸A的線性范圍進(jìn)行考察，結(jié)果表明馬兜鈴酸A進(jìn)樣量在1ng～511ng之間，峰面積值與馬兜鈴酸A的量呈較好的線性，r=1.0000。其次對(duì)方法的重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性，加樣回收率、耐用性等進(jìn)行考察。該方法重復(fù)性、中間精密度試驗(yàn)結(jié)果的RSD分別為1

5、.25％、1.45％，重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果相對(duì)偏差為3.70％；重復(fù)性、加樣回收試驗(yàn)中，按“中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”的要求，對(duì)范圍進(jìn)行考察，重復(fù)性試驗(yàn)樣品的取樣量從0.25～0.75g，加樣回收試驗(yàn)對(duì)照品的加入量為0.20～0.30 mg，平均加樣回收率為100.9％，RSD為2.09％。耐用性試驗(yàn)從變化流動(dòng)相組成比例及流動(dòng)相pH值、選用不同的色譜柱等方面對(duì)建立的方法進(jìn)行耐用性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果說明建立的方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的方法

6、專屬、靈敏、準(zhǔn)確、耐用性較好，能夠滿足中藥材及其制劑中馬兜鈴酸含量測(cè)定的要求。對(duì)采集及收集到的馬兜鈴屬及細(xì)辛屬具有法定中藥材標(biāo)準(zhǔn)的22個(gè)中藥材樣品進(jìn)行了品種鑒定，再采用建立的HPLC法對(duì)其中的馬兜鈴酸A進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果表明所建立的方法專屬、準(zhǔn)確、靈敏，適用性廣，完全可以滿足中藥材中馬兜鈴酸含量測(cè)定的要求。根據(jù)試驗(yàn)測(cè)得的各個(gè)藥材含馬兜鈴酸的量結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道的馬兜鈴酸安全劑量，計(jì)算出了藥材的每日最大攝入量，為相關(guān)品種的安全評(píng)價(jià)提供重要的參考

7、。測(cè)定的藥材中苕葉細(xì)辛Asarum caudligelellum C．Y．cheng et C．S．Yang和山慈姑Asarum sugittarioides C．F．Liang2種已有法定藥材標(biāo)準(zhǔn)的馬兜鈴科藥材的含量測(cè)定均未見文獻(xiàn)報(bào)道。 建立了HPLC方法測(cè)定含有馬兜鈴科馬兜鈴屬朱砂蓮藥材的成藥朱砂蓮膠囊中馬兜鈴酸A的含量并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。應(yīng)用建立的方法測(cè)定了兩個(gè)廠家6批樣品中馬兜鈴酸A的含量。 本課題的研究結(jié)果可以