中藥中馬兜鈴酸含量的HPLC測定及復(fù)方減毒效果的MLA試驗研究.pdf

1、含馬兜鈴酸(Aristolochic Acid,AA)中藥引起的馬兜鈴酸腎病(Aristolochic Acid Nephropathy,AAN)這一現(xiàn)象已引起了人們的廣泛關(guān)注,而目前我國尚缺乏一套從細胞和分子遺傳突變水平來評價含馬兜鈴酸中藥毒性作用的檢測體系。因此,本課題希望通過研究摸索出一套檢測含馬兜鈴酸中藥毒性作用的體系。為了建立從提取到檢測含馬兜鈴酸中藥毒性作用的整套流程,本課題首先采用高效液相色譜(High Performan

2、ce Liquid Chromatography,HPLC)測定了八種中藥中馬兜鈴酸的含量,并選定其中馬兜鈴酸含量較高的單方青木香和復(fù)方龍薈丸。然后利用“小鼠淋巴瘤細胞L5178Y/TK+/-致突變試驗”(L5178Y/TK+/- Mouse Lymphoma Mutation Assay,MLA簡稱小鼠淋巴瘤細胞試驗)檢測選定的這兩種中藥的細胞毒性和遺傳毒性作用。從馬兜鈴酸含量的檢測結(jié)果來看:八種中藥中馬兜鈴酸含量在0～4.72 mg

3、/g,其中單方中藥中青木香的馬兜鈴酸含量最高(3.11512 mg/g),而復(fù)方中龍薈丸最高(4.72044 mg/g)。該方法不僅簡便,結(jié)果穩(wěn)定,分離效果好,同時回收率、精密度、重現(xiàn)性均達到滿意效果。小鼠淋巴瘤細胞試驗結(jié)果表明,馬兜鈴酸濃度分別為0、25、50、100、200μg/mL,單方青木香提取液對小鼠淋巴瘤L5178Y3.7.2c-tk+/-細胞(簡稱小鼠淋巴瘤細胞)造成的tk基因突變頻率為:115.3×10-6、303.1×

4、10-6、632.4×10-6、1346.2×10-6、2972.3×10-6;而復(fù)方龍薈丸提取液的結(jié)果依次為:115.3×10-6、122.9×10-6、237.2×10-6、586.7×10-6、1150.8×10-6。相對存活率(RS),相對懸浮增長率(RSG),相對總增長率(RTG)這些細胞毒性指標(biāo)都與青木香和龍薈丸提取液中馬兜鈴酸濃度呈反向關(guān)系。這些說明青木香和龍薈丸對小鼠淋巴瘤細胞的細胞毒性和遺傳毒性作用都隨提取液中馬兜鈴酸