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1、目的:用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)細(xì)辛含藥血清中甲基丁香酚和馬兜鈴酸A(AAⅠ)的含量進(jìn)行測(cè)定,旨在為臨床安全有效地使用細(xì)辛和客觀評(píng)價(jià)細(xì)辛提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),并建立起測(cè)定細(xì)辛含藥血清中甲基丁香酚和AAⅠ的含量的HPLC方法。
方法:
1.細(xì)辛含藥血清的制備
將北細(xì)辛根莖置于電熱干燥箱中干燥1h(溫度40℃),然后經(jīng)球磨粉碎機(jī)研磨粉碎,過(guò)5號(hào)篩(80目),即得細(xì)辛散劑,置于陰涼處密封保存?zhèn)溆谩⒊赡闟
2、D大鼠隨機(jī)分成兩組,即空白血清組和含藥血清組。其中細(xì)辛含藥血清組的細(xì)辛用藥劑量為1.78g/kg;空白血清組給予等量的生理鹽水。每天給藥2次,連續(xù)8天。在最后一次給藥2h后對(duì)大鼠進(jìn)行眼眶采血。將所采血液在室溫下靜置30min后取上清液,3000rpm離心20min,分離血清,取血清2ml,滴加甲醇8ml,混勻,2500rpm離心10min,取上清液,水浴65℃揮去甲醇,余液濃縮,過(guò)0.22μm微孔濾膜濾過(guò)除菌,分裝,-20℃條件下保存?zhèn)?/p>
3、用。
2.HPLC對(duì)細(xì)辛含藥血清中甲基丁香酚含量的測(cè)定
用HPLC法,儀器為戴安高效液相色譜儀:P680型輸液泵、在線脫水機(jī)、手動(dòng)進(jìn)樣器、TCC-100柱溫箱、PDA-100二極管陣列檢測(cè)器、chromel eon色譜工作站。條件:色譜柱為DiamonTM0DS-G18(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇-水-0.025mol/1磷酸(78∶21∶1);柱溫為室溫;檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm;流速為1m
4、l/min;進(jìn)樣20μl,測(cè)定細(xì)辛含藥血清中甲基丁香酚的含量。
3.HPLC對(duì)細(xì)辛含藥血清中AAⅠ含量的測(cè)定
用HPLC法,儀器為戴安高效液相色譜儀:P680型輸液泵、在線脫水機(jī)、手動(dòng)進(jìn)樣器、TCC-100柱溫箱、PDA-100二極管陣列檢測(cè)器、chromeleon色譜工作站。條件:色譜柱為DiamonTM0DS-C18(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇-水-醋酸(72∶27∶1);柱溫為室溫;
5、檢測(cè)波長(zhǎng)為390nm;流速為1m1/min;進(jìn)樣20μl,測(cè)定細(xì)辛含藥血清中AAⅠ的含量。
結(jié)果:細(xì)辛含藥血清中甲基丁香酚的含量為0.0032mg/m1。細(xì)辛含藥血清中AAⅠ的含量低于檢測(cè)限。
結(jié)論:
1.初步開(kāi)展了HPLC法對(duì)細(xì)辛含藥血清中甲基丁香酚和AAⅠ的含量測(cè)定;
2.建立了測(cè)定細(xì)辛含藥血清中甲基丁香酚和AAⅠ的HPLC方法;
3.細(xì)辛含藥血清中含有一定血藥濃
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