淫羊藿苷誘導(dǎo)ES細(xì)胞體外定向分化為心肌細(xì)胞的差異蛋白質(zhì)組學(xué)及其相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、浙江大學(xué)藥學(xué)院碩士學(xué)位論文淫羊藿苷誘導(dǎo)ES細(xì)胞體外定向分化為心肌細(xì)胞的差異蛋白質(zhì)組學(xué)及其相關(guān)機(jī)制研究姓名：李歡申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：朱丹雁20100101浙江人學(xué)碩lj學(xué)位論文中文摘要Es細(xì)胞體外定向分化為心肌細(xì)胞過程的研究，可深入探索心肌分化每一階段特征性基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物蛋白質(zhì)的表達(dá)及其功能模式，闡明胚胎心臟早期發(fā)生與分化的生命現(xiàn)象本質(zhì)，這對(duì)探索干細(xì)胞的分化機(jī)制和應(yīng)用有重大意義。泛素蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitinpro

2、teasomesystem，UPS)參與體內(nèi)許多生命活動(dòng)，如細(xì)胞循環(huán)和分裂、分化和發(fā)育、神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的形態(tài)建成、細(xì)胞表面受體或離子通道的調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)數(shù)量控制等。UPS是體內(nèi)降解蛋白的重要途徑，其作用機(jī)理為：1)泛素通過共價(jià)結(jié)合來標(biāo)記靶標(biāo)蛋白；2)蛋白酶體對(duì)標(biāo)記蛋白進(jìn)行降解。c末端泛素水解酶1(UbiquitinCterminalHydrolaseL1，UCHL1)的主要作用是將完成任務(wù)的泛素蛋白結(jié)合體水解，從而得到泛素單體并重復(fù)利用，使體內(nèi)

3、泛素濃度保持在一定水平，可以認(rèn)為泛素和UCHL1的表達(dá)呈正相關(guān)。有文獻(xiàn)表明，泛素可促進(jìn)Es細(xì)胞分化，而阻斷蛋白酶體的活性則可使只有在Es細(xì)胞分化早期階段才會(huì)活化的基因區(qū)域啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，說明蛋白酶體對(duì)Es細(xì)胞的分化有一定抑制作用。另有研究顯示核因子1cB(nuclearfactorrB，NFrB)啟動(dòng)能促進(jìn)Es細(xì)胞分化，而對(duì)蛋白酶體活性阻斷會(huì)導(dǎo)致NFrB的作用活性受到抑制，說明蛋白酶體對(duì)Es細(xì)胞的分化有促進(jìn)作用。由此可見，UPS在Es細(xì)胞分化

4、過程中是一把雙刃劍。UCHL1在神經(jīng)祖細(xì)胞的分化過程中起到極其重要的促進(jìn)作用。所以，我們推測(cè)，UPS系統(tǒng)在Es細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞的過程中同樣起著不可忽視的作用。本課題組前期研究已經(jīng)證實(shí)淫羊藿苷(icariin，ICA)介入后顯著提高Es細(xì)胞體外定向分化為心肌細(xì)胞的分化率，并使分化時(shí)相顯著提前，且有良好的量效和時(shí)效關(guān)系。并初步探索了ICA能促進(jìn)心肌發(fā)育依賴性基因(如BMP2、GATA4、NKx25、0cMHC、MLC2v和DAR)和心肌特

5、異性肌小節(jié)蛋白(如0【actinin和troponinT)的表達(dá)增加，并在時(shí)相上呈先后順序。這提示ICA誘導(dǎo)心肌分化與發(fā)育依賴性基因表達(dá)上調(diào)密切相關(guān)。但僅從基因的角度來研究還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，必須研究由基因轉(zhuǎn)錄和翻譯出蛋白質(zhì)的過程，才能真正揭示生命現(xiàn)象的本質(zhì)和規(guī)律。目前針對(duì)Es細(xì)胞定向分化為心肌細(xì)胞，尤其是藥物誘導(dǎo)分化的蛋白質(zhì)組學(xué)尚未見報(bào)道。若能構(gòu)建藥物誘導(dǎo)心肌細(xì)胞分化的蛋白質(zhì)差異表達(dá)圖譜，可深入探索心肌分化每一階段特征性基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物蛋白質(zhì)的表