內(nèi)源性氫化可的松6β-羥基化清除率和血漿氫化可的松濃度分別評(píng)價(jià)人體內(nèi)CYP3A的表型.pdf

1、本研究用于證明內(nèi)源性氫化可的松6β-羥基化清除率[CLm(6β)]和血漿氫化可的松濃度是否可以可靠的反映人體內(nèi)CYP3A的活性。 方法 1.建立了高效液相紫外檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定人血漿和尿中6β-羥基氫化可的松(6β-OHF)及氫化可的松(F)的濃度。 色譜條件：島津2010CHT高效液相色譜儀器，待測(cè)物在InertsilPH-3色譜柱上進(jìn)行分離，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為245nm，流速為1.0 mL·min<'-1>，使用乙睛

2、和純水的混和溶劑進(jìn)行梯度洗脫。樣品處理包括兩個(gè)步驟：血漿或尿樣上OasisHLB固相萃取柱后被乙酸乙酯一乙醚的混和溶劑洗脫，隨后有機(jī)萃取相分別用硫酸鈉飽和的堿液和酸液洗雜質(zhì)。 2.CLm(6β)和體內(nèi)CYP3A的活性的相關(guān)性。 用體內(nèi)咪達(dá)唑侖口服清除率[CLoral(MDZ)]或者1-羥基咪達(dá)唑侖(1-OHMDZ)與咪達(dá)唑侖(MDZ)血漿濃度一時(shí)間曲線下面積的比值[AUC(MR)]表示體內(nèi)CYP3A的活性。12名健

3、康志愿者口服7.5 mgMDZ，然后采集一系列靜脈血，同時(shí)收集各時(shí)間段尿樣。血漿中。MDZ、1-OHMDZ和F,尿中F和6p-OHF的濃度均采用高效液相紫外檢測(cè)法進(jìn)行測(cè)定。CLm(6β)通過(guò)CLm(6β)=X(6β)/AUC(F)計(jì)算得到,X(6β)表示某一時(shí)間段尿中6β-OHF的累積排泄量。采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)比較CLm(6β)和CLoral(MDZ)或AUC(MR)之間的相關(guān)性。 3.氫化可的松血漿濃度時(shí)間一曲線下

4、面積和AUC(MR)之間的相關(guān)性,以及克拉霉素對(duì)血漿F水平的影響。 在我們研究CLm(6β)和CLoral(MDZ)或AUC(MR)相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)中意外發(fā)現(xiàn),兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)血樣的數(shù)據(jù)(10-h和24-h時(shí)間點(diǎn))預(yù)測(cè)得到的AUC<,0-24h>(F)和AUC(MR)之間存在顯著相關(guān)性(r<,s>=-0.736,P=0.006),因此我們?cè)O(shè)計(jì)試驗(yàn)對(duì)兩者的相關(guān)性做了進(jìn)一步考察,并且研究了CYP3A抑制劑克拉霉素對(duì)血漿F水平的影響。

5、試驗(yàn)設(shè)計(jì):12名健康志愿者隨機(jī)分成兩組。該階段試驗(yàn)分兩周期進(jìn)行,兩周期間洗脫2周。在第一周期,一組志愿者每天兩次連續(xù)5天給予克拉霉素,在第5天早上大概08:00所有的志愿者口服7.5 mgMDZ后采集一系列靜脈血,第6天早上第一組志愿者給予最后1次克拉霉素。第二周期交叉重復(fù)上述過(guò)程。血漿中F,1-OHMDZ和MDZ的濃度均采用高效液相紫外檢測(cè)法進(jìn)行測(cè)定。采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)比較了AUC<,0-24h>(F)和AUC(MR)之間

6、的相關(guān)性,同時(shí)采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn),比較了克拉霉素抑制前后MDZ和1-OHMDZ藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的變化情況,以及各時(shí)間點(diǎn)血漿F濃度的變化情況。 結(jié)果 1.測(cè)定尿中6β-OHF和F的最低定量限分別為6.9 ng·mL<'-1>和2 ng·mL<'-1>，測(cè)定血漿中F的最低定量限為7.8 ng·mL<'-1>，待測(cè)物在3個(gè)不同的濃度測(cè)定得到的準(zhǔn)確度在95％和107％之間，批內(nèi)和批間精密度低于6.2％，尿6β-OHF

7、和F的萃取回收率分別為64.1±4.3和88.1±2.4％，血漿中F的萃取回收率為88.7±1.4％。 2.各時(shí)間段CLm(6β)CLoral(MDZ)或AUC(MR)之間沒(méi)有相關(guān)性(P>0.2)，兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)血樣中F的濃度(10-h和24-h)預(yù)測(cè)得到的AUC<,0-24h>(F)和AUC(MR)存在顯著相關(guān)性(r<,s>=-0.736，P=0.006)。 3.兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)血樣中F的濃度(10-h和24-h)預(yù)測(cè)得到的AU

8、C<,0-24h>(F)和AUC(MR)仍然存在顯著相關(guān)性(r<,s>=-0.685，P=0.014)，但是各時(shí)間點(diǎn)血漿F濃度在給予CYP3A抑制劑克拉霉素后未發(fā)生顯著變化(p>0.1)。 結(jié)論 1.在本研究中我們建立了一個(gè)靈敏和可重現(xiàn)的高效液相色譜方法同時(shí)測(cè)定人體血漿和尿中6β-OBF和F的濃度。 2.CLm(6β)并不能準(zhǔn)確的反映人體內(nèi)CYP3A的表型。 3.兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)血樣中F的濃度預(yù)測(cè)得到的AUC<