銀翹散精簡方與經(jīng)典方劑抗甲Ⅰ型流感病毒FM1株的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 采用30％乙醇制備銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物，進行銀翹散提取工藝評價；采用高效液相色譜法建立銀翹散經(jīng)典方指紋圖譜，結(jié)合體外抑制IV作用實驗及銀翹散提取物對小鼠IV肺炎的治療作用，從色譜峰的歸屬，抗流感病毒療效等方面比較銀翹散精簡方與經(jīng)典方的差異。
　　 材料與方法：
　　 1.采用正交試驗設(shè)計篩選銀翹散最佳提取工藝，采用30％乙醇提取方法制備銀翹散主要藥物提取物，以銀翹散主要藥物質(zhì)量控制指標(biāo)含量作為

2、工藝評價指標(biāo)，篩選與優(yōu)化銀翹散提取工藝。
　　 2.采用高效液相色譜法建立銀翹散經(jīng)典方及單味藥物指紋圖譜，同時測定銀翹散及單味藥五種有效成分，分析銀翹散指紋峰分布特征及歸屬情況。
　　 3.采用血凝試驗方法觀察銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物不同時間點體外直接抑制IV作用；研究銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物對IV感染雞胚的預(yù)防和治療作用。
　　 4.采用鼻腔接種甲型IV株誘導(dǎo)幼齡昆明種小鼠肺炎，應(yīng)用血凝試驗方法檢測肺組織血

3、凝滴度，結(jié)合小鼠一般狀態(tài)、肺組織病理切片、形態(tài)學(xué)、肺指數(shù)等指標(biāo)，鑒定小鼠IV肺炎模型，觀察不同劑量銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物對小鼠IV性肺炎的治療作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.通過正交試驗設(shè)計得知提取溶劑量及提取次數(shù)是影響出膏量重要因素，其次為提取時間，綜合考慮，最佳提取工藝選用A2B2C2，即加30％乙醇回流提取2次，每次溶劑的體積為所用藥材15倍、10倍，分別提取1.5小時、1小時。
　　 2.銀翹散經(jīng)典方

4、提取物色譜圖共有26個共有指紋峰；26個共有指紋峰都分別歸屬于9個單味藥材。從色譜峰歸屬的數(shù)量上來看，牛蒡子、金銀花、連翹所屬峰占主要，這與金銀花、連翹、牛蒡子為銀翹散君臣藥；從色譜峰的歸屬面積上來看，牛蒡子、甘草、金銀花、荊芥占主要峰值：提示了牛蒡子、金銀花、甘草、荊芥的主要化學(xué)成分是銀翹散抗IV作用物質(zhì)基礎(chǔ)，同時也佐證了銀翹散精簡方選擇藥物的精妙之所在及一定的抗流感病毒作用。
　　 3.銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物體外均可直接

5、抑制IV的活性，作用時間從1小時可持續(xù)到24小時，并且最大不凝血濃度在各時間點均能不同程度抑制病毒的增殖；其中銀翹散精簡方在6小時～12小時范圍內(nèi)抑制病毒效果顯著，最高可達32倍，18小時后作用逐漸減弱；銀翹散經(jīng)典方在12小時范圍內(nèi)抑制病毒效果顯著，最高可達32倍。
　　 4.銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物抗IV感染雞胚作用：預(yù)防和治療作用方面，銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物血凝效價與病毒對照組比較有顯著性差異（P<0.05），均能對I

6、V感染雞胚有預(yù)防和治療作用；銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物對雞胚的預(yù)防作用與利巴韋林比較無顯著性差異（P>0.05）；精簡方與經(jīng)典方兩組間比較無顯著性差異（P>0.05）；銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物對雞胚的治療作用與利巴韋林比較無顯著性差異（P>0.05）；精簡方與經(jīng)典方兩組間比較無顯著性差異（P>0.05）。
　　 5.各治療組在改善小鼠一般狀態(tài)、改善肺病理改變、減低IV血凝滴度、降低肺指數(shù)方面對IV小鼠有治療作用，但與利巴韋林組

7、比較無顯著性差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.采用30％乙醇為提取溶劑對銀翹散進行提取，對絕大多數(shù)藥材中的活性成分均有較好的提取效果，提取溶劑量及提取次數(shù)是影響出膏量重要因素，其次為提取時間。采用高效液相色譜法同時測定銀翹散經(jīng)典方中五種活性成分，方法簡便，重現(xiàn)性好，實驗設(shè)計科學(xué)合理。
　　 2.銀翹散經(jīng)典方指紋圖譜共有26個共有指紋峰，分布?xì)w屬銀翹散經(jīng)典方中九味藥材；共有峰的相對保留時間及峰面積比值

8、，可作為銀翹散主要藥物復(fù)方質(zhì)量控制的重要依據(jù)之一；在相同色譜條件下獲得藥材、中間體和制劑的色譜圖各色譜峰分離較好，復(fù)方與藥材的指紋圖譜有良好的相關(guān)性，達到指紋圖譜的技術(shù)要求。
　　 3.銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物均有不同程度的體外直接抑制IV作用，直接抑制作用時間可持續(xù)24小時，在不同時間點抑制病毒效果不同，存在時-效、量-效相關(guān)性。
　　 4.銀翹散精簡方與經(jīng)典方提取物對IV感染雞胚均有不同程度的預(yù)防和治療保護作用；銀