Cx43信號蛋白在法洛四聯(lián)癥兒童心肌細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、目的：法洛四聯(lián)癥(tctrology of Fallot,TOF)是一種主要累積右心室的聯(lián)合性先天性心臟血管畸形,為紫紺型先心病中最常見的一種。Cx43信號蛋白在心肌細(xì)胞中的異常表達(dá)和分布可以引起多種心血管疾病,心臟先天性畸形以及心臟功能的改變。本實驗通過應(yīng)用免疫組化技術(shù),流式細(xì)胞儀技術(shù)和共聚焦顯微鏡技術(shù)對具有右心室流出道梗阻的法洛四聯(lián)癥患兒的心肌組織與無右心室流出道梗阻的心臟病患兒心肌組織相比較以對Cx43信號蛋白在心肌細(xì)胞中的表達(dá)和

2、分布加以評價和研究。
　　方法：所有患兒在心臟矯治術(shù)中,小心切取右心室流出道的肥厚增生或正常的心肌標(biāo)本44例。法洛氏四聯(lián)癥患兒切取右室流出道的異常增生心肌肌束并按年齡段分組。其中Ia組患兒18名,年齡段為3月至3歲。Ib組患兒12名,年齡段3歲至6歲。對照組II組14名為無右心室流出道梗阻病變的單純室間隔缺損患兒。采用免疫組化法,流式細(xì)胞定量技術(shù)以及共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測和觀察法洛四聯(lián)癥患者的心肌細(xì)胞中Cx43信號蛋白的表達(dá)水平和三

3、維分布變化,以及與無右心室流出道畸形患者的心肌表達(dá)的差異。
　　結(jié)果：1.免疫組化研究表明,通過HE染色顯示,實驗組心肌纖維走向紊亂,細(xì)胞大小不均,較對照組心肌細(xì)胞變大,密度變小;免疫組化結(jié)果表明,對照組患兒心肌細(xì)胞Cx43顆粒典型地排列在心肌閏盤處,實驗組心肌細(xì)胞Cx43顆粒發(fā)生重排,雜亂分布于閏盤、心肌細(xì)胞膜各部位和胞漿內(nèi)。圖像分析結(jié)果顯示實驗組Cx43蛋白面積為21.45±7.75,Cx43含量百分比為31.74±10.44

4、,平均灰度72.36±0.43;對照組中Cx43蛋白面積為33.82±8.23,Cx43含量百分比為40.22±10.14,平均灰度99.80±0.53。TOF組Cx43蛋白表達(dá)量明顯低于對照組,兩組之間存在顯著性差(P<0.O5)。
　　2.使用流式細(xì)胞儀對Cx43蛋白進(jìn)行定量檢測,以平均熒光強(qiáng)度大小代表Cx43蛋白表達(dá)量。實驗組IaCx43蛋白平均熒關(guān)強(qiáng)度為87.33±8.4,Ib為101.42±7.9,實驗組平均Cx43蛋白

5、平均熒關(guān)強(qiáng)度為95.68±12.6,對照組Cx43蛋白平均熒關(guān)強(qiáng)度為133.37±23.9。經(jīng)t檢驗Ia組與Ib組之間,實驗組與對照組之間均有顯著差異(P<0.05)。
　　3.通過激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),對照組心肌細(xì)胞Cx43熒光顆粒呈斑點或帶狀,其排列有高度的規(guī)律性。在心肌纖維的縱切面上,Cx43呈鏈狀分布在與心肌纖維長軸垂直的細(xì)胞端-端相接的閏盤部位,極少數(shù)位于與心肌纖維長軸平行的細(xì)胞側(cè)-側(cè)相接的部位;實驗組心肌細(xì)胞Cx4

6、3熒光顆粒則發(fā)生重排,部分顆粒已經(jīng)開始從閏盤處向四周擴(kuò)散,分布紊亂,出現(xiàn)在整個細(xì)胞膜表面各個部位以及細(xì)胞胞漿內(nèi),甚至表現(xiàn)為不同區(qū)域的增多或減少,一些Cx43顆粒呈鏈狀大量地遷移至細(xì)胞側(cè)面連接處。
　　結(jié)論：1.在法洛四聯(lián)癥患兒的心肌細(xì)胞中Cx43信號蛋白其動態(tài)分布和表達(dá)均無法按照正常時空調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行,其在心肌閏盤處表達(dá)較少,且各年齡段患兒均出現(xiàn)這種表達(dá)和分布雜亂,異常等情況。
　　2.具有右心室流出道梗阻的法洛四聯(lián)癥患兒的心

7、肌組織與無右心室流出道梗阻的心臟病患兒心肌組織中Cx43的表達(dá)有明顯不同。右心室流出道梗阻的法洛四聯(lián)癥患兒的心肌組織中Cx43呈雜亂,不成熟性分布。無右心室流出道梗阻的心臟病患兒心肌組織中Cx43表達(dá)相對規(guī)律,成熟分布較多。Cx43信號蛋白的雜亂,無序排列可能對右心室結(jié)構(gòu)構(gòu)型和功能異常產(chǎn)生決定性影響。
　　3.Cx43信號蛋白與心血管系統(tǒng)早期的正常分化與發(fā)育存在密切的聯(lián)系,通過對Cx43的研究有助于從分子生物學(xué)水平上探討先心病的發(fā)