CBP與STAT4-STAT6的功能相關(guān)關(guān)系研究及在哮喘Th失衡中的作用.pdf

1、在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子STAT家族的各成員中，主要被IL-12激活的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活因子4（signal transducer and activator of transcription4 STAT4）蛋白和被IL-4激活的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活因子6（signal transducer and activator of transcription6 STAT6）蛋白被認(rèn)為在Th1/Th2的分化調(diào)控及因此失調(diào)引發(fā)的各種炎癥性疾病中

2、發(fā)揮著重要的作用。研究表明，許多轉(zhuǎn)錄因子通過競爭與協(xié)同激活分子CBP（cAMP效應(yīng)元件結(jié)合蛋白）結(jié)合。CBP在STAT4和STAT6介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄過程中起著重要作用，STAT4和STAT6可能通過競爭性結(jié)合CBP上有限的位點(diǎn)而影響靶基因轉(zhuǎn)錄。在本課題前期研究中，通過改變細(xì)胞內(nèi)STAT4和STAT6的量，以CBP介導(dǎo)，首次從蛋白質(zhì)的角度證明了STAT4/STST6存在競爭性抑制關(guān)系. 目的：探討兩類重要核因子STAT4、STAT6

3、在CBP介導(dǎo)下是否在功能活性存在競爭性抑制關(guān)系。超表達(dá)CBP是否能解除這種抑制。 方法：構(gòu)建含有能被STAT4特異性結(jié)合的IFN-γ啟動(dòng)子的表達(dá)載體pCAT3-IFN-γ，構(gòu)建含有能被STAT6特異性結(jié)合的IL-4受體啟動(dòng)子區(qū)域的熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-IL-4R。用脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒及CBP表達(dá)質(zhì)粒（由倫敦大學(xué)阮雄中教授友情饋贈(zèng)）共轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞。通過改變胞外細(xì)胞因子含量，分別激活STAT4和STAT6，采用熒光素

4、酶（Luciferase，LUC）和氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（chlorampbeniol acetyltransferase，CAT）報(bào)告基因檢測系統(tǒng)分別測定LUC和CAT活性變化。增加CBP質(zhì)粒轉(zhuǎn)入量，再測定LUC和CAT活性變化。 結(jié)果：經(jīng)酶切和測序鑒定，重組質(zhì)粒pCAT3-IFN-γ和pGL3-IL-4R構(gòu)建成功。報(bào)告基因檢測顯示，在恒定的rhIL-4濃度條件下，增加rhIL-12濃度，LUC活性是逐漸降低的；反之，在恒定的rh