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1、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)是引起醫(yī)院感染的最主要致病菌之一,同時(shí)近年來(lái)在世界范圍內(nèi)社區(qū)獲得性MRSA(CA-MRSA)感染死亡的病例報(bào)道日漸增多。到目前為止,國(guó)外研究發(fā)現(xiàn),醫(yī)院獲得性 MRSA(HA-MRSA)和CA-MRSA不僅流行范圍不同,而且在生物學(xué)特性方面(如SCCmec、毒素種類和耐藥模式等)也有顯著差別,尤其是殺白細(xì)胞素(PVL),多由CA-MRSA分泌,而HA-MRSA中少見(jiàn)。目前國(guó)內(nèi)對(duì)MRSA的研究缺乏系統(tǒng)性,
2、對(duì)于國(guó)內(nèi)流行克隆的分類尚不完善,本實(shí)驗(yàn)利用耐藥表型分析和SCCmec、spa、PFGE、MLST基因分型方法,研究上海地區(qū)MRSA耐藥性和流行特點(diǎn),為進(jìn)一步及時(shí)診斷、治療MRSA感染及爆發(fā)流行的有效預(yù)防和控制打下基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)菌株和實(shí)驗(yàn)方法: 1.收集分離自上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院、上海交通大學(xué)附屬上海市第六人民醫(yī)院、上海交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、上海市肺科醫(yī)院和瑞金醫(yī)院閔行分院的金黃色葡萄球菌共154株,用頭孢西丁紙片
3、擴(kuò)散法和mecA基因PCR方法篩查MRSA。同時(shí)采用瓊脂稀釋法進(jìn)行13種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn),以全面了解MRSA的耐藥情況。 2.使用多種引物用PCR方法進(jìn)行SCCmec分型和PVL毒力因子檢測(cè)。再根據(jù)臨床資料,用PFGE分型方法對(duì)140株P(guān)VL陰性(PVL-)MRSA和9株P(guān)VL陽(yáng)性(PVL+)MRSA進(jìn)行同源性分析,了解上海地區(qū)MRSA的流行情況 3.對(duì)PVL陰性MRSA的主要40株流行克隆株和9株P(guān)VL陽(yáng)性MRSA進(jìn)
4、行spa分型,同時(shí)對(duì)9株P(guān)VL陽(yáng)性MRSA進(jìn)行MLST分型,以了解上海地區(qū)MRSA的流行情況并與世界主要流行菌株進(jìn)行比較。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1.140株P(guān)VL-MRSA對(duì)苯唑西林耐藥的MIC50和MIC90均為256μg/ml。其中93株同時(shí)對(duì)青霉素、苯唑西林、慶大霉素、磺胺甲唑惡、克林霉素、紅霉素、環(huán)丙沙星和四環(huán)素耐藥的菌株,占66.4%,是主要的耐藥模式。SCCmec包括II型、III型和IV型,以III型為主。PFGE
5、分型方法顯示PVL-MRSA存在16組(A-O)流行克隆型,其中以C型(30.7%)、B型(13.6%)和I型(10.7%)為主,并且主要分布在瑞金、市六醫(yī)院、肺科醫(yī)院和瑞金閔行分院。5所醫(yī)院選取的40株流行克隆株有5種spa型。 2.9株P(guān)VL+MRSA對(duì)苯唑西林的MIC50和MIC90分別為16μg/ml和128μg/ml。對(duì)(紅霉素)、克林霉素和慶大霉素同時(shí)耐藥的占55.6%。SCCmec包括SCCmecIV、V,以SCC
6、mecIV型(66.7%)為主。存在A(66.7%)、B(11.1%)和C(22.2%)3種流行克隆型,同時(shí)分別發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的MLST ST1114型和一個(gè)新的spa t3384型。 結(jié)論: 1.在上海地區(qū)PVL陰性MRSA共發(fā)現(xiàn)16(A-O)組PFGE型別,其中C型(30.7%)B型(13.6%)和I型(10.7%)是主要的流行克隆型。這些克隆株在5所醫(yī)院特別是成人醫(yī)院間存在交叉?zhèn)鞑?,但在各醫(yī)院分布不均,各自主要的PF
7、GE型別不同。 2.上海地區(qū)PVL陰性MRSA共有3個(gè)SCCmec型別和9個(gè)耐藥模型,耐藥性強(qiáng)且呈多重耐藥是這些菌株的主要特點(diǎn)。 3.PVL陰性、SCCmecⅢ、對(duì)紅霉素、環(huán)丙沙星、克林霉素、四環(huán)素、慶大霉素、磺胺甲惡唑、(利福平)[E-C-L-T-G-M-(R)]同時(shí)耐藥的藥敏模式的MRSA克隆可能是上海地區(qū)HA-MRSA主要流行克隆株,是醫(yī)院感染控制的重點(diǎn)。同時(shí)臨床醫(yī)生在治療HA-MRSA感染患者時(shí),要謹(jǐn)慎使用抗菌藥
8、物。 4.用spa分型法對(duì)40株P(guān)VL陰性MRSA的主要流行株進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)5種克隆株,其中t459和t1764是國(guó)內(nèi)首次報(bào)道。另外3型也是國(guó)際廣泛流行的型別。我們采用的spa分型法是對(duì)MRSA進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查并進(jìn)行國(guó)家和地區(qū)間比較的簡(jiǎn)單、實(shí)用的方法。 5.首次對(duì)上海地區(qū)PVL陽(yáng)性MRSA進(jìn)行系統(tǒng)的分子流行病學(xué)調(diào)查,共發(fā)現(xiàn)5株ST30-IV-t318(MLST/SCCmec/spa),1株ST30-IV-t3384,
9、1株ST 1114-V-t318,2株ST88-V-t1376。其中spa型t3384和MLST型ST1114是首次報(bào)道。 6.PVL 陽(yáng)性、ST 30-IV、t318,可能是上海地區(qū)CA-MRSA主要流行克隆株,主要引起兒童呼吸道感染。此克隆株也是西南太平洋地區(qū)主要的流行株。但本研究發(fā)現(xiàn)的上述菌株除對(duì)β內(nèi)酰胺類抗菌藥耐藥以外,對(duì)非β內(nèi)酰胺類抗菌藥如紅霉素、克林霉素等多重耐藥現(xiàn)象明顯。 7.新一代唑烷酮類抗菌藥物Ceft
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