烏梅丸對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠免疫調(diào)控作用機制的研究.pdf

1、目的：潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種病因尚未完全闡明的慢性炎癥性腸病。主要臨床表現(xiàn)為持續(xù)或反復發(fā)作的腹痛、粘液膿血便、腹瀉和里急后重。由于目前該病發(fā)病率逐年增加，發(fā)病機制尚未完全闡明，又缺乏有效的治療藥物，故尋找有效的防治藥物也一直是研究的熱點。中醫(yī)藥治療該病有悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗，大量的臨床實踐證明，烏梅丸治療UC療效顯著，副作用小。本課題通過建立UC大鼠模型來研究烏梅丸對UC的治療作用及機制，特別是通過觀察其對UC大鼠細胞因子(IL-

2、8、IL-1 3)及粘附分子(CD44、CD54)、κ基因結(jié)合核因子(NF-κB)、信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子6(STAT6)的影響，深入揭示烏梅丸治療UC的作用機制，為中醫(yī)藥治療UC提供一定的實驗基礎和理論依據(jù)。 方法：將健康SD大鼠84只(雌雄各半)按雌雄隨機分為6組，分別為正常對照組、模型組、柳氮磺胺吡啶組、烏梅丸大、中、小劑量組，每組14只。除正常對照組外，其余5個組均采用免疫加局部刺激(2，4-二硝基氯苯加醋酸)復合法，復

3、制UC大鼠模型。模型成功后，分別觀察蒸餾水、SASP、烏梅丸大、中、小劑量治療UC大鼠后的一般狀況、結(jié)腸病理改變及超微病理結(jié)構(gòu)的變化；用雙抗夾心ELISA法檢測UC大鼠病變結(jié)腸粘膜IL-8、IL-13含量的變化，用鏈霉菌抗生物素一過氧化酶法(SP法)檢測病變結(jié)腸粘膜免疫指標NF-κB、CD44、CD54、IL-8的光密度的變化；用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法(RT-PCR法)檢測病變結(jié)腸粘膜STAT6mRNA的表達的變化。 結(jié)果：

4、(1)實驗1結(jié)果表明：模型組UC大鼠與正常對照組比較體重明顯減輕(P<0.01)，結(jié)腸組織損傷評分明顯比正常對照組高(P<0.01)，模型組結(jié)腸組織細胞因子IL-8的表達明顯升高，IL-13的表達明顯降低，與正常組比較均有非常顯著性差異(P<0.01)。 (2)實驗2結(jié)果表明：模型組UC大鼠從癥狀上可見粘液稀便、甚至血便、消瘦、懶動、皮毛無光澤、食欲減退、體重減輕(與正常對照組比較，P<0.01)。模型組結(jié)腸組織損傷評分明顯比正

5、常對照組高(P<0.01)，經(jīng)過烏梅丸及SASP治療后，烏梅丸各組及SASP組結(jié)腸組織損傷評分均有不同程度降低。在結(jié)腸粘膜上皮缺損情況、腺體排列是否規(guī)則、粘膜充血狀況、炎細胞浸潤等方面，各組病理改變及電鏡下超微結(jié)構(gòu)均有明顯的差異。 (3)實驗3結(jié)果表明：模型組UC大鼠的組織中促炎細胞因子IL-8的含量高于正常對照組(P<0.01)，抗炎細胞因子IL-13含量低于正常組(P<0.01)；烏梅丸大、中、小劑量組、SASP組IL-8含

6、量均低于模型組(P<0.01或P<0.05)，IL-13含量均高于模型組(P<0.01或P<0.05)；烏梅丸大劑量組IL-8、IL-13的含量分別與SASP組比較，均有顯著性差異(P<0.05)。 (4)實驗4結(jié)果表明：模型組UC大鼠結(jié)腸組織中CD44、CD54的光密度均高于正常對照組(P<0.01)。經(jīng)治療后，烏梅丸大、中、小劑量組及SASP組均能降低CD44、CD54的光密度，與模型組相比，有非常顯著性差異(P<0.01)

7、，烏梅丸大劑量組CD44、CD54的光密度均高于SASP組(P<0.01)。 (5)實驗5結(jié)果表明：模型組uC大鼠結(jié)腸組織NF-kB的光密度高于正常對照組(P<0.01)。烏梅丸大、中、小劑量組及SASP組均能降低NF-kB的光密度，與模型組相比，有顯著性差異(P<0.01)，烏梅丸大劑量組NF-kB的光密度高于SASP組(P<0.01)。 (6)實驗6結(jié)果表明：模型組UC大鼠結(jié)腸組織STAT6mRNA的表達低于正常對照

8、組，經(jīng)烏梅丸和SASP治療后，STAT6mRNA的表達升高，烏梅丸大、中、小劑量組及SASP組與模型組比較均有非常顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)論：模型復制成功。烏梅丸對UC大鼠的治療是有效的，其中中藥組存在量效關(guān)系，烏梅丸大劑量組療效優(yōu)于SASP組。細胞因子IL-8、IL-13均參與uc形成。烏梅丸通過上調(diào)IL-13、下調(diào)IL-8，從而恢復細胞因子的失衡，達到調(diào)節(jié)免疫反應的目的。黏附因子CD44、CD54均參與uc的形成，烏