兔移植靜脈重塑進程中凋亡及增殖的時間特性.pdf

1、目的:
　　建立兔自體靜脈移植再狹窄模型,采用形態(tài)學(xué)觀察、免疫組化、TUNEL法、電鏡觀察以及 Western Blot等多種研究手段,研究移植靜脈重塑過程中凋亡水平及增殖的時間特性,以期為預(yù)防移植靜脈再狹窄提供調(diào)控、干預(yù)的時間點。
　　方法:
　　對42只健康純種新西蘭大耳白兔建立兔頸外靜脈頸總動脈旁路移植術(shù)模型。將其分為7組,分別于術(shù)前、術(shù)后第1天、術(shù)后第3天、術(shù)后第7天、術(shù)后第14天、術(shù)后第28天以及術(shù)后第90天

2、將移植靜脈取出,并對其進行狹窄程度、PCNA蛋白水平、凋亡及透射電鏡等相關(guān)檢測。
　　結(jié)果:
　　1、內(nèi)膜厚度正常靜脈組為(4.66μm±0.6μm);術(shù)后第1天開始略有下降(1.47μm±0.3μm),與正常靜脈組比較差異有顯著性(P<0.05);至術(shù)后第3天組之后持續(xù)上升,術(shù)后第三天組(3.41μm±0.2μm),術(shù)后第7天組(18.1μm±2.5μm),術(shù)后第14天組(35.7μm±5.1μm),術(shù)后第28天組(65.

3、5μm±5.0μm),術(shù)后第90天組(93.5μm±6.4μm),均高于正常靜脈組,差異有顯著性(P<0.05);中膜+外膜厚度正常靜脈組為(6.4μm±0.9μm);術(shù)后持續(xù)升高。術(shù)后第1天組(8.5μm±1.1μm),術(shù)后第3天組(15.6μm±1.9μm),術(shù)后第7天組(45.6μm±5.0μm),術(shù)后第14天組(62.3μm±2.7μm),術(shù)后第28天組(123.9μm±5.6μm),術(shù)后第90天組(130.6μm±10.0μm

4、),均高于正常靜脈組,差異有顯著性(P<0.05)。
　　2、Western Blot示:PCNA目的條帶與內(nèi)參條帶灰度百分比在正常靜脈組為40.6％±2.4%;術(shù)后第一天組(36.5%±5.1%)低于正常靜脈組,差異有顯著性(P<0.05);之后開始上升,術(shù)后第三天組(43.6%±4.4%),高于正常靜脈組,差異有顯著性(P<0.05);至術(shù)后第7天組到達最高峰(77.9%±7.1%),高于正常靜脈組,差異有顯著性(P<0.05

5、),高于術(shù)后第一天組,差異有顯著性(P<0.05);之后緩慢下降。
　　3、免疫組化示:PCNA陽性細胞百分比在正常靜脈組為(6.07%±1.1%);術(shù)后第1天開始略有下降(5.05%±0.9%),與正常靜脈組比較差異有顯著性(P<0.05);至術(shù)后第3天組開始上升(11.26%±1.6%),與正常靜脈組比較差異有顯著性(P<0.05);至術(shù)后第7天達到高峰(31.2%±3.4%),高于正常靜脈組,差異有顯著性(P<0.05),高

6、于術(shù)后第一天組,差異有顯著性(P<0.05);之后緩慢下降
　　4、TUNEL法示:凋亡細胞在正常靜脈組表達極少,為(1.49%±0.2%),術(shù)后第1天即達高峰(18.02%±1.9%),與正常靜脈組比較差異有顯著性(P<0.05);至術(shù)后第3天組開始下降(7.29%±0.7%),與正常靜脈組比較差異有顯著性(P<0.05);至術(shù)后第7天降為(2.09%±0.5%),與正常靜脈組比較差異有顯著性(P<0.05);之后持續(xù)維持在低水

7、平。
　　5、透射電鏡觀察顯示術(shù)后第一天組電鏡下可見核仁消失、染色質(zhì)邊集;術(shù)后第3天組可見合成型平滑肌細胞,含大量高爾基體以及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。以及凋亡晚期的標志性凋亡小體。術(shù)后第7天可見大量收縮表型平滑肌細胞,及其周圍包繞的彈性纖維。以及大量膠原纖維。術(shù)后第14天組、術(shù)后第28天組依舊可見少量合成表型的平滑肌細胞以及大量收縮表型的平滑肌細胞,以及大量膠原纖維。
　　結(jié)論:
　　1、靜脈移植術(shù)后增殖與凋亡共存,提示增殖和凋亡