四物湯類方治療婦科血瘀證的物質基礎與配伍規(guī)律研究——少腹逐瘀湯及其組方藥材的效應物質基礎研究.pdf

1、論文共分四章開展對少腹逐瘀湯及其組方藥材的效應物質基礎研究。
　　 第一章文獻綜述部分，介紹了中國傳統(tǒng)醫(yī)學、現(xiàn)代醫(yī)學對原發(fā)性痛經的認識，以及寒凝血瘀原發(fā)性痛經的中醫(yī)藥治療概況，并對少腹逐瘀湯及其組方藥材的臨床應用以及化學、藥理研究進展進行綜述。
　　 實驗研究部分分為兩個主要研究內容，一是少腹逐瘀湯全方的研究，二是少腹逐瘀湯組方藥材的研究。具體研究內容和結論如下：
　　 第二章以少腹逐瘀湯臨床傳統(tǒng)用藥方式--湯劑

2、為研究對象，采用水煎煮的方法進行提取，并采用大孔吸附樹脂技術、膜分離技術等現(xiàn)代分離手段進一步分離富集，最后獲得18個極性不同的樣品供效應評價和化學分析用。
　　 選擇與痛經有關的兩個效應評價模型：離體器官模型（離體子宮收縮模型）和體外篩選模型（血小板聚集等），從不同的角度對少腹逐瘀湯及其不同分離部位進行生物效應評價。
　　 1.小鼠離體子宮收縮試驗結果表明，少腹逐瘀湯揮發(fā)油部位（SF-1）、少腹逐瘀湯水煎液部位(SF-2

3、)、醇沉上清液部位(SF-5)、大孔樹脂吸附后40％乙醇洗脫部位(SF-14)、60％乙醇洗脫部位(SF-13)均呈現(xiàn)出對子宮收縮的顯著抑制活性；而沉淀部分（生物大分子物質）中相對分子質量小于5kD部位(SF-19)則對小鼠離體子宮收縮呈現(xiàn)興奮作用。
　　 2.體外抑制ADP誘導的血小板聚集試驗表明，少腹逐瘀湯經大孔樹脂吸附后10％~40％乙醇洗脫部位(SF-9~SF-11)具有顯著抑制ADP誘導的血小板聚集的活性(P＜0.05

4、，P＜0.01，P＜0.001)，其中40％乙醇洗脫部位(SF-11)活性最強(P＜0.001)。
　　 3.采用薄層色譜法、高效液相色譜法、液一質聯(lián)用技術等現(xiàn)代分析手段對少腹逐瘀湯主要效應部位(SF-11)進行分析研究。通過標準品對照，質譜解析確定了40％乙醇洗脫部位(SF-11)中7個化學成分，分別為香草酸、咖啡酸、芍藥內酯苷、芍藥苷、阿魏酸、香蒲新苷、異鼠李素-3-0-新橙皮苷。采用HPLC-DAD法建立了少腹逐瘀湯主要效

5、應部位中7個主要成分的含量測定方法，結果測得香草酸、咖啡酸、芍藥內酯苷、芍藥苷、阿魏酸、香蒲新苷、異鼠李素-3-0-新橙皮苷的含量分別為：1.28％、0.24％、0.71％、0.23％、12.05％、2.00％、2.98％，為少腹逐瘀湯及有效部位的復雜效應物質的闡明及質量控制提供依據。
　　 第三章少腹逐瘀湯組方藥材揮發(fā)油部位生物效應及成分分析。
　　 1.選擇離體子宮收縮模型對少腹逐瘀湯組方藥材揮發(fā)油進行效應評價，試驗

6、結果表明等生藥劑量下少腹逐瘀湯組方藥材揮發(fā)油對小鼠離體子宮收縮均有不同程度的抑制活性，比較ED50以及95％可信限值可以看出，組方藥材揮發(fā)油的活性強弱依次為：川芎油＞當歸油＞小茴香油＞肉桂油＞干姜油，且組方藥材揮發(fā)油的活性均強于少腹逐瘀湯揮發(fā)油。
　　 2.采用GC-MS聯(lián)用技術對少腹逐瘀湯及其組方揮發(fā)油的化學成分進行了分析，鑒定了揮發(fā)油中的大部分成分，并通過比較揮發(fā)油總離子流圖，認為少腹逐瘀湯揮發(fā)油低沸點成分主要來自于肉桂、干

7、姜、小茴香，而高沸點成分主要來自于當歸、川芎，且組方藥材揮發(fā)油與復方揮發(fā)油中的主要成分有較大差異。
　　 3.采用體外抑制ADP誘導的血小板聚集模型對肉桂揮發(fā)油進行了進一步的效應評價，血小板聚集試驗結果顯示，肉桂油、肉桂醛對ADP誘導的血小板聚集有顯著的抑制作用。
　　 4.采用小鼠離體子宮收縮模型、芳香化酶抑制劑體外篩選模型評價沒藥揮發(fā)油的生物效應；采用GC-MS聯(lián)用技術對沒藥揮發(fā)性成分進行分離分析、鑒定。小鼠離體子宮