我國(guó)近10年肺結(jié)核發(fā)病率分析及結(jié)核分枝桿菌快速檢測(cè)方法研究.pdf

1、目的:
　　1.以省級(jí)行政區(qū)域?yàn)檠芯繉?duì)象，建立2004-2012年全國(guó)31個(gè)?。ㄗ灾螀^(qū)、直轄市）肺結(jié)核地理信息數(shù)據(jù)庫(kù)，制作肺結(jié)核發(fā)病的專(zhuān)題地圖，并描述我國(guó)肺結(jié)核發(fā)病在時(shí)間、地點(diǎn)、人群的“三間分布”特征，確定2004-2012年我國(guó)肺結(jié)核高發(fā)區(qū)、高發(fā)期和高危人群，為部隊(duì)肺結(jié)核防控關(guān)鍵技術(shù)研發(fā)提供依據(jù)。
　　2.篩選結(jié)核分枝桿菌特異性的基因作為L(zhǎng)AMP檢測(cè)的靶基因序列，設(shè)計(jì)并篩選特異性的引物，用檢測(cè)濁度法和鈣黃綠素染色法對(duì)該引物

2、的特異性與靈敏性測(cè)試，為部隊(duì)結(jié)核病現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)提供一種新的檢測(cè)與判斷方法。
　　方法:
　　1.近10年肺結(jié)核發(fā)病率分析
　　1.1.數(shù)據(jù)收集和處理的方法
　　利用中國(guó)疾病監(jiān)測(cè)信息報(bào)告管理系統(tǒng)，收集研究區(qū)域內(nèi)肺結(jié)核網(wǎng)絡(luò)報(bào)告數(shù)據(jù)和人口信息，利用Excel2010軟件，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)篩選和排序整理。
　　1.2利用ArcGIS9.0軟件，建立我國(guó)各省結(jié)核地理信息數(shù)據(jù)庫(kù)，從時(shí)間、空間、人群三方面，對(duì)我國(guó)結(jié)核發(fā)病分

3、布特征進(jìn)行描述性分析。
　　2.結(jié)核分枝桿菌快速檢測(cè)方法研究
　　2.1引物篩選
　　通過(guò)NCBI在線數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索，選擇結(jié)核分枝桿菌的特異性保守序列IS6110為靶序列，并針對(duì)這一序列用軟件(PrimerExplorer4)設(shè)計(jì)特異性的LAMP引物，并篩選最佳引物。
　　2.2特異性評(píng)價(jià)
　　用篩選的最佳引物分別檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌，評(píng)價(jià)該引物檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的特異性。
　　2.3靈敏性評(píng)

4、價(jià)
　　將提取的結(jié)核分枝桿菌DNA進(jìn)行10倍梯度稀釋?zhuān)迷撘镞M(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)其靈敏性與傳統(tǒng)PCR方法的差異。
　　結(jié)果:
　　1.近10年肺結(jié)核發(fā)病率分析
　　1.1全國(guó)肺結(jié)核發(fā)病概況
　　2004-2012年我國(guó)31個(gè)省、直轄市和自治區(qū)，共報(bào)告肺結(jié)核發(fā)病病例9663，728例，死亡26，932例，十年來(lái)我國(guó)肺結(jié)核病例報(bào)告總體呈下降趨勢(shì)。
　　1.2全國(guó)肺結(jié)核空間分布情況
　　新疆肺結(jié)核年均發(fā)病

5、率為181.42/10萬(wàn)居全國(guó)首位，貴州、海南、廣西、重慶、西藏、黑龍江六?。ㄖ陛犑?、自治區(qū)）年均發(fā)病率次之，北京、山東、上海和天津四?。ㄖ陛犑校┠昃l(fā)病率低于50/10萬(wàn)。
　　1.3全國(guó)肺結(jié)核時(shí)間分布情況
　　從2004-2012年我國(guó)肺結(jié)核月均發(fā)病率來(lái)看，一、二季度肺結(jié)核發(fā)病率較高，三、四季度肺結(jié)核發(fā)病率較低，其中，1月和3月發(fā)病率較高且相近，自3月份起發(fā)病率逐月下降，12月發(fā)病率為一年中最低。
　　1.4全國(guó)肺

6、結(jié)核人間分布情況
　　肺結(jié)核患者中男性高于女性;從年齡分布上看，14歲以下人群年均發(fā)病率較低，老年人（60歲以后）年均發(fā)病率最高。從職業(yè)分布上看，我國(guó)肺結(jié)核發(fā)病主要以農(nóng)民為主。
　　2.結(jié)核分枝桿菌快速檢測(cè)方法研究
　　2.1最佳引物篩選
　　以結(jié)核分支桿菌IS6110基因序列為靶序列，設(shè)計(jì)5套LAMP引物為反應(yīng)引物，以結(jié)核分枝桿菌為模板在濁度儀中進(jìn)行LAMP反應(yīng)，結(jié)果顯示引物JH164組為最佳擴(kuò)增引物。

7、　　2.2JH164引物檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的特異性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
　　用JH164引物對(duì)14種細(xì)菌DNA進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，JH164引物具有良好的特異性。
　　2.3JH164引物檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌靈敏性實(shí)驗(yàn)
　　用JH164引物分別用濁度法和鈣黃綠素染色法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)10倍梯度稀釋的結(jié)核分枝桿菌DNA，結(jié)果顯示，用JH164引物進(jìn)行LAMP結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)的靈敏性是傳統(tǒng)PCR方法的10倍，最低檢測(cè)值為:101pg/μl。<

8、br>　　結(jié)論:
　　1.在過(guò)去的10年，我國(guó)肺結(jié)核發(fā)病率呈總體下降趨勢(shì)，但防控形勢(shì)依然嚴(yán)峻。我國(guó)肺結(jié)核病在新疆發(fā)病率最高，提示該地區(qū)結(jié)核病防控應(yīng)作為重點(diǎn)。從發(fā)病時(shí)間來(lái)看，我國(guó)肺結(jié)核發(fā)病多集中在一、二季度，提示此時(shí)為結(jié)核病多發(fā)季節(jié)，應(yīng)做好結(jié)核病防控措施。從人群角度來(lái)看，肺結(jié)核患者多為務(wù)農(nóng)者，以男性為主，老年人發(fā)病率較高。
　　2.用LAMP方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌具有簡(jiǎn)單、快速、特異性高、靈敏性好的特點(diǎn)，而且反應(yīng)在恒溫狀態(tài)下即可