中藥活性成分與血清蛋白的相互作用及其對藥物結(jié)合影響的研究.pdf

1、藥物的蛋白結(jié)合作用是任何新藥早期臨床藥物動(dòng)力學(xué)研究不可缺少的內(nèi)容。一方面，藥物的蛋白結(jié)合作用對其藥理活性和藥代動(dòng)力學(xué)都有深刻的影響，因此深入研究藥物-蛋白結(jié)合作用的分子基礎(chǔ)具有重大的理論和實(shí)踐意義。另一方面，研究藥物-蛋白間的相互作用有助于對蛋白質(zhì)亞基間的結(jié)合、抗體與抗原的結(jié)合、蛋白酶與抑制劑的結(jié)合以及蛋白質(zhì)與核酸的結(jié)合等生命過程中基本問題的認(rèn)識。本文對最常用的中藥甘草中的主要活性成分-甘草次酸等中藥活性成分與血清蛋白的相互作用進(jìn)行了研

2、究，并初步探討其對藥物(生物活性物質(zhì))與血清蛋白結(jié)合的影響，研究內(nèi)容主要包括下列幾個(gè)部分。 一、利用光譜學(xué)(熒光、圓二色、紫外)和毛細(xì)管前沿分析方法詳細(xì)研究了甘草次酸(GA)與血清蛋白的相互作用。計(jì)算了反應(yīng)的結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、熱力學(xué)參數(shù)，GA與色氨酸殘基的距離，考察了常見金屬離子對結(jié)合的影響。對GA在蛋白等電點(diǎn)前后的結(jié)合進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示結(jié)合的模式不同。利用位置探針確定siteI是GA的一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。用同步熒光、CD、紫外

3、光譜等方法研究GA的加入對蛋白構(gòu)象的影響，顯示GA能使蛋白的色氨酸殘基的疏水性增加，α螺旋百分?jǐn)?shù)有所下降。兩種方法得到的結(jié)合常數(shù)基本一致，但是位點(diǎn)數(shù)存在差別。研究結(jié)果表明GA有高(達(dá)K=8.28×105L.mol-1)、低兩類結(jié)合位點(diǎn)，總的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)為8，蛋白與GA濃度之比為0.375時(shí)，結(jié)合率已高達(dá)95.2％，即GA與蛋白的結(jié)合具有高親和、高容量和高結(jié)合率的特點(diǎn)，可能對其它藥物和中藥活性成分與蛋白結(jié)合產(chǎn)生影響，從而影響它們的藥理和毒理

4、作用。 二、利用光譜學(xué)(熒光、圓二色、紫外)和超離心法詳細(xì)研究了利尿劑呋塞米(FU)和二氫氯噻(HZ)與血清蛋白的相互作用，以及甘草次酸對它們的替代作用。計(jì)算了反應(yīng)的結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、熱力學(xué)參數(shù)。用熒光法考察了GA等中藥活性成分和常見金屬離子對FU/HZ結(jié)合的影響，并考察了其它利尿劑對FU結(jié)合的影響。計(jì)算了HZ與色氨酸殘基的距離。利用位置探針和疏水探針ANS及離子強(qiáng)度影響探討FU的結(jié)合位點(diǎn)，初步認(rèn)定FU為非特異結(jié)合。用同步熒

5、光、CD、紫外光譜等方法研究FU的加入對蛋白構(gòu)象的影響，顯示低濃度的FU不能使蛋白的色氨酸殘基的疏水性發(fā)生變化，但濃度較大時(shí)使蛋白的色氨酸殘基的疏水性顯著降低，F(xiàn)U的存在使α螺旋百分?jǐn)?shù)有所下降。另外詳細(xì)考察了油酸的存在對FU結(jié)合的影響，并對常用的熒光猝滅數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行了比較和評價(jià)。 三、熒光技術(shù)結(jié)合紫外等方法用于研究魚腥草中的甲基酮類活性成分與血清白蛋白的結(jié)合作用。對數(shù)據(jù)進(jìn)行Stem-Volmer分析，初步分析了這些充分與蛋白

6、的相互作用力?？疾炝薌A等中藥活性成分和常見金屬離子對結(jié)合的影響，結(jié)果顯示GA對結(jié)合有較大影響。利用位置探針和疏水探針ANS探討2UC/DC的結(jié)合位點(diǎn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，甲基酮活性成分與血清蛋白的結(jié)合是可飽和的，并呈酸度、溫度和鏈長依賴性。結(jié)合是非特異性的，作用力以疏水作用為主輔以靜電引力。鋅離子的共存時(shí)，甲基酮的加入會(huì)引起較大的構(gòu)象變化。 四、研究了荷花堿(NF)與血清白蛋白的相互作用及GA對中藥活性成分結(jié)合的影響。計(jì)算了NF的結(jié)

7、合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、熱力學(xué)參數(shù)?？疾炝薌A等中藥活性成分和脂肪酸對結(jié)合的影響，荷花堿與色氨酸殘基的距離。用同步熒光、CD、紫外光譜研究了NF的加入對蛋白構(gòu)象的影響，顯示NF能使蛋白的色氨酸殘基的疏水性增加，α螺旋百分?jǐn)?shù)有所增加。研究了GA對槲皮素、金絲桃苷、蘆丁，槲皮苷、山奈酚、大黃酸、大黃素等中藥活性成分與蛋白結(jié)合的影響。 五、對環(huán)境毒性物質(zhì)蘇丹I與白蛋白的相互作用特征進(jìn)行了研究。得到了反應(yīng)的結(jié)合常數(shù)、結(jié)合熱力學(xué)性質(zhì)和結(jié)合位點(diǎn)

8、等參數(shù)。探討了蘇丹I與BSA相互結(jié)合時(shí)其供體-受體間的距離。 六、用分子對接(Docking)的方法初步研究呋塞米與人血清白蛋白的結(jié)合。借助多元線性回歸方法建立了定量結(jié)構(gòu)-結(jié)合常數(shù)關(guān)系(QSPR)模型。 七、分別建立了快速、簡單的測定人血漿中賴諾普利和鹽酸羥嗪的LC-ESI-MS分析方法。分別考察了基質(zhì)干擾、萃取率、選擇性、線性范圍、準(zhǔn)確度、方法回收率和穩(wěn)定性。方法被成功地應(yīng)用于生物等效性研究。方法對于研究藥物體內(nèi)結(jié)合有