擁擠環(huán)境中脂肪酸鹽與血清蛋白相互作用研究.pdf

1、脂肪酸作為機體主要的供能物質(zhì)，根據(jù)其碳鏈長度的不同分為短鏈、中鏈和長鏈脂肪酸。血清蛋白是脂肪酸在體內(nèi)的主要運輸者，不同鏈長及種類的脂肪酸與血清蛋白的結(jié)合機制不同，從而對機體生理生化反應的影響也存在差異。因此，系統(tǒng)地研究脂肪酸與血清蛋白的結(jié)合機制對了解脂肪酸在體內(nèi)的轉(zhuǎn)運具有重要的生理意義。然而，過去關(guān)于脂肪酸與血清蛋白相關(guān)研究是在稀溶液中進行的，大分子擁擠環(huán)境中脂肪酸與血清蛋白相互作用卻鮮有報道。
　　本課題采用不同濃度及分子量的聚

2、乙二醇(PEG)、葡聚糖20（Dextran20）模擬生物體內(nèi)的大分子擁擠環(huán)境，利用等溫滴定量熱技術(shù)(ITC)、穩(wěn)態(tài)熒光光譜(FL)研究不同鏈長的脂肪酸鹽(Na-FA)在擁擠環(huán)境中與牛血清白蛋白(BSA)之間的相互作用，同時采用差示掃描熱量(DSC)和圓二色譜(CD)方法研究擁擠環(huán)境中Na-FA對BSA二級結(jié)構(gòu)以及熱力學穩(wěn)定性的影響。
　　本課題主要研究的內(nèi)容包括:
　　(1) PEG2000擁擠環(huán)境中，不同鏈長脂肪酸鹽與血

3、清蛋白相互作用的研究
　　研究發(fā)現(xiàn)，與稀溶液中相比，在PEG2000擁擠環(huán)境中，短鏈Na-FA與BSA的結(jié)合方式由一位點結(jié)合逐漸過渡到兩位點結(jié)合，且辛酸鈉(C8)、壬酸鈉(C9)和癸酸鈉(C10)與BSA的結(jié)合常數(shù)(K)均大于稀溶液中。而月桂酸鈉(C12)，油酸鈉(C18∶1)和亞油酸鈉(C18∶2)與BSA的K則均小于稀溶液。從熱力學參數(shù)可以得出，飽和Na-FA與BSA結(jié)合過程中存在負協(xié)同效應，主要以靜電相互作用為主;不飽和Na

4、-FA與BSA結(jié)合過程中存在正協(xié)同性，以靜電力和范德華力為主。在PEG2000中，BSA的相變溫度（Tm）下降，但是加入Na-FA均使BSA的Tm升高，其中C8、C9和C10使BSA的升高值大于純BSA，存在正的協(xié)同性。C12、C18∶1和C18∶2使BSA相變溫度(Tm)的升高值小于純BSA，即在所有濃度的擁擠環(huán)境中都無法抵消擁擠環(huán)境對BSA相變溫度的影響。
　　(2)其他大分子擁擠環(huán)境中脂肪酸鹽與血清蛋白相互作用研究
　

5、　研究表明，短鏈Na-FA在PEG200和PEG20000中的結(jié)合方式與在Dextran20中結(jié)合方式不同。相同濃度PEG擁擠環(huán)境中，C8和C9與BSA的K及焓變值（△H）大于Dextran20中，而C10、C12在PEG和Dextran20中的結(jié)合方式均呈現(xiàn)出不對稱的“U”型曲線。此外，擁擠環(huán)境幾乎不影響C18∶1和C18∶2與BSA的結(jié)合類型和結(jié)合方式，僅僅影響結(jié)合過程中的△H。對BSA的熱力學穩(wěn)定性及結(jié)構(gòu)研究表明，擁擠環(huán)境均使BS