大鼠腦損傷后apo E和β-APP時序性表達的研究.pdf

1、載脂蛋白E(apolipoproteinE,apoE)和p淀粉樣前體蛋白(beta-amyloidprecursorprotein，β-APP)在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、功能的穩(wěn)定及損傷后修復中都起到重要的作用。目前國內(nèi)外對此報道相對較少，且尚未見自由落體撞擊致腦損傷后apoE和β-APP表達規(guī)律的研究報道。為了進一步闡明其在創(chuàng)傷性腦損傷中的作用和地位，探討在早期腦損傷時間推斷的應用價值，本課題對大鼠中度腦挫傷模型進行更深入地研究。 本

2、課題選用健康成年雄性SD大鼠，采用改進的Edward自由落體撞擊儀復制中度腦挫傷模型，通過常規(guī)蘇木素-伊紅染色技術(hematoxylinandeosin，HE)對大鼠中度腦挫傷后14d內(nèi)繼發(fā)性腦損傷的病理學改變、apoE和β-APP的時序及空間分布特征進行光鏡觀察，同時運用免疫組織化學鏈霉素抗生物素蛋白過氧化酶連接法(StreptavidinPeroxidaseConjunctionMethod，SP)，并結合計算機圖象分析技術，對a

3、poE和β-APP表達變化的規(guī)律與腦損傷時間的關系進行定量分析。 實驗組用自由落體撞擊法形成大腦右頂葉中度腦挫傷后，按不同的預定時間段(0.5h、2h、6h、12h、24h、3d、7d和14d，)分批處死動物(每個時間段取大鼠5只)并立即取出全腦置于4％多聚甲醛溶液(4℃)中固定；假性損傷組經(jīng)0.4％戊巴比妥鈉(用量為：1ml/kg)麻醉后僅行開顱手術而不行落體撞擊，并于術后3d處死、取腦；死后損傷組于處死后1h行落體撞擊。各組

4、標本均在腦挫傷灶中心旁開2mm處，冠狀切取挫傷灶前、后端的腦組織。標本經(jīng)取材制片后作apoE和β-APP免疫組化染色觀察，同時行HE染色對照。利用計算機圖象分析技術，定量測定免疫組化染色切片的陽性細胞平均光密度、陽性細胞百分比及陽性細胞數(shù)。所得數(shù)據(jù)用SAS8.0統(tǒng)計學軟件包進行分析。 實驗結果顯示：(1)腦損傷后0.5h組，腦皮質(zhì)神經(jīng)元apoE出現(xiàn)陽性表達，3d達到高峰，隨后下降；腦損傷后0.5h組，在海馬區(qū)出現(xiàn)apoE強陽性反

5、應；CA1區(qū)在傷后3d達到高峰，而CA2～CA4區(qū)在24h達到高峰，隨后逐漸下降；海馬區(qū)apoE免疫染色強度依次為：CA3＞CA4＞CA2＞CA1。(2)皮質(zhì)內(nèi)β-APP在腦損傷后表達呈一定波動性，0.5h表達明顯增加后，逐漸下降，12h降至最低，低于對照組，隨后再次出現(xiàn)表達增加，3d達高峰；海馬CA1區(qū)在腦損傷后24hβ-APP表達開始逐漸下降，3d降至最低，而CA2～CA4區(qū)僅在3d組較對照組顯著降低，14d均回到對照組水平；齒狀回

6、(DG)內(nèi)β-APP在腦損傷后12h低于對照組。 本實驗結果表明：傷后0.5h即出現(xiàn)表達，因此apoE蛋白可作為腦損傷早期診斷一個新的敏感指標；對照組皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬無apoE表達，而傷后才出現(xiàn)表達，也可為法醫(yī)學上鑒別生前和死后腦損傷提供依據(jù)。皮質(zhì)β-APP及apoE蛋白表達存在一定時續(xù)規(guī)律性，可望作為法醫(yī)學上推斷腦損傷時間的客觀指標之一。腦損傷后海馬內(nèi)β-APP表達較皮質(zhì)挫傷灶周圍變化不明顯，因此在法醫(yī)腦損傷時間推斷上的應用意