rhEPO對(duì)大鼠缺氧缺血性腦損傷后VEGF和VEGFR1表達(dá)的影響.pdf

1、背景：隨著早產(chǎn)兒、低出生體重兒以及重度缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemicencephalopathy，HIE)新生兒存活率提高，新生兒腦損傷及其伴隨的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥成為兒科領(lǐng)域關(guān)注的重要問題。研究證實(shí)腦室周圍白質(zhì)軟化(Periventricularleukomalacia，PVL)是早產(chǎn)兒缺氧缺血性腦損傷主要病理學(xué)改變，引起國內(nèi)外學(xué)者廣泛的關(guān)注。近年來研究發(fā)現(xiàn)，促紅細(xì)胞生成素不僅參與造血的調(diào)控，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)也有保護(hù)作用，然而

2、對(duì)于其作用機(jī)制尚未完全明了。重組人促紅細(xì)胞生成素（recombinant human erythropoietin，rhEPO）是一種通過基因重組技術(shù)合成的糖蛋白，與天然EPO有著相同氨基酸序列，生物學(xué)活性也相似，在基礎(chǔ)和臨床研究中更顯示了良好的療效及應(yīng)用前景。
　　目的：檢測外源性促紅細(xì)胞生成素對(duì)缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic braindamage，HIBD)新生大鼠腦組織中VEGF及受體表達(dá)的影響，探討促

3、紅細(xì)胞生成素對(duì)腦損傷的保護(hù)機(jī)制，為臨床缺氧缺血性腦損傷新生兒的早期治療提供依據(jù)。
　　方法：選擇3日齡新生SD大鼠180只，隨機(jī)分為5組:假手術(shù)組、對(duì)照組（模型組）、rhEPO小劑量治療組（rhEPOS組）、rhEPO中劑量治療組（rhEPOM組）、rhEPO大劑量治療組（rhEPOH組），每組36只。制作缺氧缺血?jiǎng)游锬Ｐ湍M早產(chǎn)兒腦室周圍白質(zhì)軟化損害的病理改變。rhEPOS組、rhEPOM組、rhEPOH組在缺氧缺血后即刻分別給

4、予1000U/kg.d、3000U/kg.d、5000U/kg.d的rhEPO腹腔注射，連續(xù)3天。對(duì)照組在術(shù)后于治療組相同時(shí)間點(diǎn)給予腹腔注射等體積生理鹽水。假手術(shù)組不予缺氧缺血處理也于相同時(shí)間點(diǎn)注射等體積生理鹽水。各組均在每次注射后12h(即造模后12h、36h、60h)處死大鼠，手術(shù)取出大腦組織并保存?zhèn)溆谩２捎妹庖呓M織化學(xué)技術(shù)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time Fluorescent Quantitative PCR，Real-

5、Time PCR)技術(shù)，檢測造模后12h、36h、60h血管內(nèi)皮生長因子及血管內(nèi)皮生長因子受體蛋白和基因的表達(dá)變化;分析rhEPO對(duì)大鼠缺氧缺血后VEGF和VEGFR1表達(dá)的影響。SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.神經(jīng)行為學(xué)改變:對(duì)照組大鼠出現(xiàn)全身發(fā)紺，進(jìn)乳少，活動(dòng)少，反應(yīng)差，頻繁點(diǎn)頭狀抽搐，大小便失禁，部分動(dòng)物于缺氧缺血過程中死亡。假手術(shù)組表現(xiàn)為進(jìn)乳好，活動(dòng)有力，精神反應(yīng)好。rh

6、EPOS組與對(duì)照組相比，行為學(xué)差別不大;rhEPOM組出現(xiàn)進(jìn)乳尚可，活動(dòng)較少，反應(yīng)稍差;rhEPOH組出現(xiàn)進(jìn)乳可，活動(dòng)可自如，反應(yīng)可。
　　2.體重改變:在缺氧缺血后新生大鼠出現(xiàn)體重下降，體重增長緩慢情況，隨著rhEPO用量的增大，動(dòng)物的體重增長速度越接近正常生長速度。各組間使用單因素方差分析比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.腦組織病理形態(tài)學(xué)改變:假手術(shù)組腦白質(zhì)細(xì)胞排列有序，細(xì)胞核圓形、淡染，層次分明，左右側(cè)腦室對(duì)

7、稱。對(duì)照組在造模后出現(xiàn)腦白質(zhì)區(qū)細(xì)胞腫脹、排列紊亂，胼胝體變薄，疏松壞死區(qū)域形成。在rhEPO干預(yù)下，治療組腦組織病理學(xué)呈現(xiàn)較對(duì)照組明顯好轉(zhuǎn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.免疫組化結(jié)果及Real-Time PCR結(jié)果:VEGF蛋白、VEGFR1蛋白在假手術(shù)組腦組織內(nèi)呈低量表達(dá)，在對(duì)照組中呈高表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。rhEPO治療組中VEGF蛋白、VEGFR1蛋白的表達(dá)明顯上升，與對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

8、(P＜0.05)，隨治療劑量的增加表達(dá)量依次增加，不同劑量之間有顯著性差異(P＜0.05)。VEGFmRNA、VEGFR1mRNA在假手術(shù)組腦組織內(nèi)呈低量表達(dá)，在對(duì)照組中呈高表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。rhEPO治療組中的VEGFmRNA、VEGFR1mRNA表達(dá)明顯上升，與對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，隨之治療劑量的增加表達(dá)量依次增加，不同劑量之間有顯著性差異（P＜0.05）。
　　5.相關(guān)性分析:經(jīng)Sp

9、earman秩相關(guān)性分析后，VEGF蛋白與VEGFR1蛋白兩者的表達(dá)相關(guān)性分析顯示二者呈正相關(guān)(r=0.881，P＜0.05);VEGFmRNA與VEGFR1mRNA兩者的表達(dá)相關(guān)性分析顯示二者呈正相關(guān)(r=0.854，P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.rhEPO可顯著增加缺氧缺血性腦損傷新生大鼠腦組織中VEGF、VEGFR1蛋白和基因的表達(dá)。
　　2.缺氧缺血性腦損傷大鼠腦組織中VEGF、VEGFR1蛋白和基因的