rhG-CSF對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后腦組織VEGF及VEGFR2的影響.pdf

1、目的：新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic—ischemicencephalopathy，HIE)是新生兒常見(jiàn)疾病，可導(dǎo)致新生兒死亡及新生兒期以后永久性神經(jīng)系統(tǒng)損傷，目前尚無(wú)有效的治療方法。本研究建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic—ischemicbraindamage，HIBD)模型，給予重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(recombinanthumangranulocytecolony—stimulatingfactor，rhG—

2、CSF)干預(yù)，觀察不同時(shí)間點(diǎn)腦組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-2(vascularendothelialgrowthfactorreceptor-2，VEGFR2)表達(dá)的變化，從而揭示G—CSF發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制，為臨床上治療新生兒缺氧缺血性腦病開辟新的途徑。 方法：7日齡Wistar大鼠168只，雌雄不限，體重12～18g，隨機(jī)分為

3、三組：假手術(shù)對(duì)照組，HIBD模型組，rhG—CSF治療組，每組各56只。HIBD模型組和rhG—CSF治療組均先制備HIBD模型，三組均根據(jù)處死時(shí)間不同又分為7個(gè)亞組：6h組、12h組、24h組、48h組、72h組、5d組、7d組，每亞組各8只。模型采用阻斷左側(cè)頸總動(dòng)脈后置于含8％O2的低氧環(huán)境中2h制備而成。治療組在HIBD后即刻給予rhG—CSF(60μg/kg)頸部皮下注射，每日一次，連續(xù)五天。各組分別于HIBD后不同時(shí)間點(diǎn)取腦組

4、織，假手術(shù)組也在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取腦組織，肉眼觀察腦組織大體形態(tài)變化，光鏡下觀察各組大鼠左側(cè)腦組織HE染色的病理改變，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)三組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)左側(cè)腦組織VEGF及VEGFR2的表達(dá)。 結(jié)果：(1)新生大鼠在HIBD后出現(xiàn)不同程度的行為異常。(2)HIBD模型組在HIBD后各時(shí)間點(diǎn)肉眼觀腦組織大體形態(tài)出現(xiàn)不同程度的異常改變，而rhG—CSF治療組各時(shí)間點(diǎn)腦組織大體形態(tài)基本正常。(3)HE染色：假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)腦組織細(xì)胞層次

5、清楚、細(xì)胞形態(tài)正常；HIBD模型組在HIBD后6h、12h出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)細(xì)胞水腫、變性，24h、48h神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的壞死，細(xì)胞核碎裂、溶解，72h細(xì)胞壞死更明顯，至5d、7d時(shí)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，膠質(zhì)細(xì)胞增生，細(xì)胞排列紊亂。rhG—CSF治療組各時(shí)間點(diǎn)腦組織病理變化較HIBD模型組明顯減輕，細(xì)胞排列尚規(guī)則。(4)VEGF和VEGFR2的表達(dá)：VEGF和VEGFR2陽(yáng)性表達(dá)均呈棕黃色細(xì)顆粒沉積，陽(yáng)性細(xì)胞可表達(dá)于大腦皮層和海馬，

6、陽(yáng)性著色主要位于神經(jīng)細(xì)胞胞漿及突起。假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)腦組織均無(wú)明顯VEGF及VEGFR2陽(yáng)性表達(dá)；HIBD模型組腦組織VEGF及VEGFR2陽(yáng)性表達(dá)在HIBD后逐漸增加，均于24-48h達(dá)高峰，以后逐漸下降，不同時(shí)間點(diǎn)比較，VEGF，VEGFR2陽(yáng)性表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)，與假手術(shù)組相比，各時(shí)間點(diǎn)HIBD模型組VEGF，VEGFR2陽(yáng)性表達(dá)均明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；rhG—CSF治療組各時(shí)間點(diǎn)腦組織

7、均可見(jiàn)明顯的VEGF，VEGFR2陽(yáng)性表達(dá)，與HIBD模型組和假手術(shù)組分別相比，各時(shí)間點(diǎn)治療組VEGF，VEGFR2表達(dá)均明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)。(5)新生大鼠HIBD后腦組織VEGF和VEGFR2的表達(dá)成直線正相關(guān)關(guān)系(r=0．778，P＜0.01)。 結(jié)論：(1)新生大鼠HIBD后給予rhG—CSF治療可減輕腦組織的病理改變，提示rhG—CSF對(duì)新生大鼠HIBD具有神經(jīng)保護(hù)作用。(2)新生大鼠HIBD后