流式DNA倍體及CYFRA21-1在膀胱癌的臨床應用研究.pdf

1、膀胱癌是目前我國泌尿系統腫瘤中最常見的惡性腫瘤，早期診斷和術后定期復查對該病的治療至關重要。膀胱鏡檢查是診斷膀胱移行細胞癌的最準確方法，因系創(chuàng)傷性檢查，尚有一些禁忌癥，其臨床應用有時受到限制。最常用的非創(chuàng)傷性檢查方法是尿細胞學檢查，其敏感性一般在20％—70％之間，且受腫瘤分級和檢查者經驗的主觀影響。另外，一些新的尿液腫瘤標記物相繼出現并應用于臨床，雖優(yōu)于尿細胞學檢查，但其敏感性和特異性尚需進一步提高和完善。因此尋找無創(chuàng)傷性的，更客觀方

2、便和高敏感性、高特異性的尿液腫瘤標志物具有重要臨床意義。 雖然有文獻報道尿脫落細胞DNA倍體分析可望成為診斷膀胱癌的一種輔助方法，但由于缺乏流式DNA倍體定量檢測的標準方法，限制了該方法的應用。本文建立了流式DNA倍體分析的標準方法，探討其臨床應用價值。此外，本文運用新一代國際先進的電化學發(fā)光免疫標記技術檢測尿液脫落細胞CYFRA21—1含量具有高敏感性和特異性特點；應用SYBR Green熒光染料和18SrRNA看家基因建立熒

3、光實時定量RT—PCR方法檢測膀胱癌尿液脫落細胞CYFRA21—1基因mRNA，為膀胱癌早期診斷提供新思路。有關運用熒光實時定量RT—PCR技術檢測膀胱癌尿液脫落細胞CYFRA21—1基因的表達及探討膀胱癌尿液脫落細胞DNA倍體和CYFRA21—1蛋白濃度變化的關系尚未見相關文獻報道。本文的另一創(chuàng)新點是從腫瘤生物學行為整體和發(fā)展變化的角度聯合流式DNA倍體和CYFRA21—1腫瘤標志物的選擇。探討尿液脫落細胞DNA倍體和CYFRA21—

4、1在膀胱腫瘤的臨床應用價值。 本文研究結果表明： 膀胱癌組、急性尿道感染及腺性膀胱炎組和對照組之間，尿流式DNA倍體分析中DI(DNA指數)、SPF(S期細胞峰百分比)、PI(增殖指數)、G0/G1期CV值和CYFRA21—1蛋白含量存在顯著差異(P＜0.05)，說明尿液脫落細胞DI、SPF、PI、G0/G1期CV值和CYFRA21—1蛋白可作為膀胱癌輔助診斷指標。 膀胱癌組尿液脫落細胞DI、PI、SPF、G0/

5、G1期CV值及CYFRA21—1蛋白含量在性別上的差異無統計學意義(P＞0.05)；隨著膀胱癌病理分級和臨床分期的增加，DI、SPF和CYFRA21—1蛋白含量相應逐漸增加，病理分級為Ⅲ級、Ⅳ級膀胱癌患者DI顯著高于Ⅰ級和Ⅱ級患者(P＜0.05)；臨床分期T4期膀胱癌患者PI和CYFRA21—1蛋白含量顯著高于Ta期、T1期、T2期、T3期患者(P＜0.05)。說明膀胱脫落細胞DNA倍體和CYFRA21—1蛋白濃度的變化與膀胱癌的惡性程

6、度相關。 臨床分期為Ta期的膀胱癌組異倍體率是20％，T1—T4期膀胱癌組異倍體率是62.5％，差異具有顯著性意義(P＜0.05)。反映浸潤型膀胱癌異倍體率顯著高于淺表型膀胱癌(P＜0.05)。說明膀胱癌尿液流式DNA異倍體率與膀胱癌病變發(fā)展相關。 SPF＞15％作為膀胱腫瘤惡性的判斷標準，研究結果發(fā)現膀胱癌不同病理分級及臨床分期尿液脫落細胞SPF＞15％的患者陽性率相差不大，但膀胱癌組SPF＞15％的患者陽性率顯著高

7、于對照組，可作為膀胱癌發(fā)生的輔助判斷指標之一。 以細胞G0/G1期CV＞10％作為膀胱腫瘤惡性的判斷標準，研究結果發(fā)現膀胱癌不同病理分級及臨床分期尿液脫落細胞G0/G1期CV＞10％的患者陽性率相差不大，但膀胱癌組CV＞10％的患者陽性率顯著高于對照組，可作為膀胱癌發(fā)生的輔助判斷指標之一。 原發(fā)性膀胱癌和復發(fā)性膀胱癌患者尿液脫落細胞DI、PI、SPF、G0/G1期CV值及CYFRA21—1蛋白含量差異無統計學意義(P＞0

8、.05)，說明尿液流式DNA倍體分析和CYFRA21—1蛋白含量可能不適合預示膀胱癌復發(fā)。 膀胱癌尿液細胞DNA倍體中DI、PI、SPF、G0/G1期CV值和CYFRA21—1蛋白相關性分析，發(fā)現尿液脫落細胞DNA分析中DI和G0/G1期CV值與CYFRA21—1蛋白含量在膀胱癌的輔助診斷評價具有相關性。 聯合檢測尿液流式DNA倍體和CYFRA21—1蛋白的敏感性和特異性與單指標檢測的敏感性和特異性比較，差異具有顯著性意

9、義(P＜0.05)，說明聯合流式DNA倍體和CYFRA21—1蛋白輔助診斷膀胱癌的敏感性和特異性顯著提高，具有重要臨床應用價值。 采用熒光實時定量RT—PCR技術檢測膀胱癌及癌旁組織中CYFRA21—1基因mRNA的表達情況，結果發(fā)現在膀胱癌組織中的CYFRA21—1基因mRNA表達高于在癌旁組織中的表達，提示CYFRA21—1與膀胱癌的發(fā)生有關，可作為膀胱癌的一個新的腫瘤標記物。 采用熒光實時定量RT-PCR技術檢測膀

10、胱癌患者尿液脫落細胞CYFRA21-1基因mRNA的轉錄水平，發(fā)現膀胱癌尿液脫落細胞CYFRA21-1基因mRNA水平與CYFRA21-1蛋白質表達變化趨勢一致；同時，在不同病理分化程度的患者尿液中，病理分化程度越差．CYFRA21-1基因mRNA轉錄水平越高。 尿液流式DNA倍體及CYFRA21-1表達異常與膀胱癌生物學行為相關，聯合檢測尿液流式DNA倍體和CYFRA21-1可以提高膀胱癌輔助診斷的敏感性，是監(jiān)測膀胱癌療效的無