梅毒螺旋體大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥基因突變位點檢測.pdf

1、研究背景:梅毒(syphilis)是一種慢性經(jīng)典的性傳播疾病，梅毒螺旋體(Treponema Pallidum，TP)是引起梅毒的病原體，其可侵犯全身各器官（全身皮膚黏膜、心血管、神經(jīng)、骨骼等），造成多系統(tǒng)損害，產(chǎn)生多種多樣的癥狀和體征，梅毒也因此被稱為“最大模仿者”。對于梅毒的治療，青霉素是首選的治療藥物，但是在治療上存在一些問題，如:青霉素過敏反應及肌肉注射引起疼痛和不便等，嚴重影響了青霉素應用的安全性和患者的依從性。鑒于青霉素治療

2、的局限性，人們一直在尋找既具有較好療效，又方便服用的治療藥物。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素如阿奇霉素是近年來備受關(guān)注的藥物，對梅毒螺旋體有殺傷活性，治療早期及潛伏期梅毒有效，在組織中的半衰期較長，只需單劑量口服，并且可同時治療其他性傳播疾病(STD)，因此大環(huán)內(nèi)酯類抗生素被用于梅毒的預防及治療。但近年來研究發(fā)現(xiàn)，梅毒螺旋體對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素出現(xiàn)了耐藥，耐藥基因定位于TP23SrRNA基因的2058或2059位由A突變?yōu)镚(A2058G，A2059G

3、)。之后多個國家和地區(qū)進行了大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥基因突變位點的檢測，耐藥率各不相同。迄今為止，山東地區(qū)未有梅毒螺旋體大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥突變位點檢測的報道，因此本研究收集66例梅毒螺旋體DNA標本進行TP23SrRNA基因突變位點檢測。
　　實驗目的:1.檢測山東地區(qū)TP菌株是否存在大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥基因（23SrRNA）突變位點;2.統(tǒng)計山東地區(qū)TP大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥率;3.評估山東地區(qū)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素能否作為治療梅毒的替代

4、藥物。
　　實驗方法:收集疑似梅毒患者肛門及生殖器潰瘍標本，提取TP DNA，經(jīng)實時熒光定量PCR證實為梅毒螺旋體，然后進行23SrRNA基因目的片段的擴增，對PCR擴增產(chǎn)物進行純化并直接目的片段測序進行序列分析，檢測突變位點。
　　實驗結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn)梅毒螺旋體大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥基因23SrRNA基因上的兩個突變位點，且66份標本均含有突變位點(100％)，61份標本測序含有A2058G突變，5份標本測序含有A2059G