金黃色葡萄球菌對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥機制的研究.pdf

1、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素廣泛地用于治療細菌感染，多數(shù)臨床分離金黃色葡萄球菌感染對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥。研究體外耐藥金黃色葡萄球菌抗菌活性及對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥機制，對臨床治療耐大環(huán)內(nèi)酯類金黃色葡萄球菌引起的感染和開發(fā)新的大環(huán)內(nèi)酯類藥物有著重要意義。 目的： 研究四川大學華西醫(yī)院分離的18株金黃色葡萄球菌對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥性及其耐藥機制，為臨床合理使用抗生素提供參考。 方法： 收集、分離及鑒定金黃色葡萄球

2、菌，用瓊脂二倍稀釋法及紙片擴散法測定臨床分離金黃色葡萄球菌對抗菌藥物MIC值，以標準敏感菌株ATCC25923糞腸球菌ATCC29212作為質(zhì)控菌株；同時做泵抑制劑羰基氰氯苯腙(CCCP)、利血平的逆轉(zhuǎn)試驗。紙片擴散法檢測耐藥金黃色葡萄球菌，參照NCCLS2005標準用以篩選其對克林霉素誘導型耐藥株。誘導型耐藥株用D試驗檢測，提取10株細菌的質(zhì)粒和染色體DNA，擴增產(chǎn)物片段長度分別為610bp，359bp，520bp。同時對1株耐藥菌株

3、ermb和eFmc基因進行PCR-DNA直接測序分析。用0.22μ m微孔濾膜構(gòu)建金黃色葡萄球菌生物膜模型；測定克拉霉素、環(huán)丙沙星的MIC值；銀染金黃色葡萄球菌生物膜，掃描電鏡(SEM)觀察生物膜形態(tài)結(jié)構(gòu)，連續(xù)稀釋法進行活菌計數(shù)。同時用高效液相色譜(HPLC)檢測大環(huán)內(nèi)酯類抗生素存在時的環(huán)丙沙星透過生物膜后的滲透濃度。 結(jié)果： MIC測定結(jié)果顯示，10株耐藥金黃色葡萄球菌對7種大環(huán)內(nèi)酯類藥物無一株敏感，且表現(xiàn)出較高水平的

4、耐藥。對其它抗菌素的耐藥率由高到低依次是苯唑西林、氯霉素、克林霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星。而對于萬古霉素未發(fā)現(xiàn)有耐藥株。耐藥金黃色葡萄球菌D試驗陽性率為40％，同時聯(lián)用CCCP、利血平前后，對紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、麥迪霉素的MIC值出現(xiàn)了明顯變化的菌株分別有6、7、7、6株和7、6、7、4株。 PCR結(jié)果顯示9株菌擴增出ermC基因，1株細菌擴增出ermB基因,ermA基因為陰性。經(jīng)DNA的序列比對分析發(fā)現(xiàn)：ermB、erm

5、c基因顯示出各自的同源性為99％。erinB基因第159位堿基由G→A；第213位堿基由A→G；其編碼的氨基酸并未發(fā)生改變；ermC基因第389位堿基由A→G；其編碼的氨基酸由谷氨酸(Glu)130→甘氨酸(G1y)；生物膜(BF)可在七天內(nèi)穩(wěn)定形成，1/16MIC、1/4MIC濃度克拉霉素、阿奇霉素顯著減少單用環(huán)丙沙星組中的BF活菌數(shù)(P<0.05)。聯(lián)用克拉霉素后，環(huán)丙沙星的生物膜滲透性得到提高。 結(jié)論： 1. er