解脲脲原體對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的敏感性及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、研究背景與目的：解脲脲原體是人體泌尿生殖道感染的常見病原體之一。近年來,隨著大環(huán)內(nèi)酯類抗生素在臨床上的廣泛使用,解脲脲原體對(duì)該類藥物的耐藥率逐年上升。因此,本研究的目的是：(1)了解南京地區(qū)解脲脲原體對(duì)臨床常用大環(huán)內(nèi)酯類藥物克拉霉素和阿奇霉素的耐藥狀況并提出用藥建議；(2)研究解脲脲原體對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥機(jī)制。 研究方法：(1)用法國梅里埃支原體鑒定試劑盒進(jìn)行解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum,Uu)

2、的初步分離和鑒定,并對(duì)解脲脲原體培養(yǎng)陽性物進(jìn)一步經(jīng)過濾培養(yǎng)和特異性PCR試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)。(2)采用微量肉湯培養(yǎng)法檢測(cè)確認(rèn)的309株解脲脲原體對(duì)臨床常用大環(huán)內(nèi)酯類藥物克拉霉素和阿齊霉素的最低抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。(3)根據(jù)藥敏結(jié)果分層,從309株解脲脲原體菌株中,選取耐藥、敏感、中介的菌株,應(yīng)用primer3在線設(shè)計(jì)程序,自行設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增不同耐藥菌株的核糖體蛋白L4、L

3、22、L16、L23,以及23S rRNA的II區(qū)和V區(qū),并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,采用Blast比對(duì)法比較臨床菌株序列與標(biāo)準(zhǔn)菌株序列的差異。(4)針對(duì)藥敏試驗(yàn)中的敏感株進(jìn)行體外的克拉霉素和阿奇霉素的藥物誘導(dǎo),將其誘導(dǎo)成耐藥株后,再進(jìn)行相關(guān)耐藥機(jī)制的研究。 研究結(jié)果：(1)本研究共采集標(biāo)本576份,分離培養(yǎng)解脲脲原體341株,能良好傳代進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的309株。(2)309株解脲脲原體對(duì)克拉霉素和阿齊霉素的耐藥率分別為9.6％和21.

4、6％,MIC50為0.25mg/L和4mg/L,MIC90為1mg/L和8mg/L。(3)在耐藥株X01核糖體蛋白L4上,出現(xiàn)第67位谷氨酰胺(Q)→賴氨酸(K)和71位甘氨酸(G)→絲氨酸(S)的改變,耐藥株C360、Y187、Z08在核糖體蛋白L4的第25位氨基酸處分別發(fā)生了頡氨酸(V)→谷氨酸(E)、頡氨酸(V)→丙氨酸(A)和頡氨酸(V)→苯丙氨酸(F)的改變。(3)在耐藥株Y187上,23S rRNA的2566處堿基T→C,2

5、569處缺失堿基G,262l處堿基A→T。敏感株3736在2243處發(fā)生G→A的堿基突變。(4)敏感株Y292經(jīng)阿奇霉素誘導(dǎo)耐藥后,L22核糖體蛋白上有10個(gè)位點(diǎn)的堿基發(fā)生突變,導(dǎo)致9個(gè)氨基酸改變。 研究結(jié)論：(1)南京地區(qū)解脲脲原體對(duì)臨床常用的兩種大環(huán)內(nèi)酯類藥物克拉霉素和阿齊霉素存在不同程度的耐藥,阿齊霉素的耐藥率較高,應(yīng)引起臨床重視。(2)核糖體蛋白L4、L22以及23S rRNA上相應(yīng)區(qū)域堿基、氨基酸的改變,可能是導(dǎo)致解脲