人軟骨特異性蛋白ChM-Ⅰ對(duì)骨肉瘤血管生成抑制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、分類號(hào)UDC孝卞斜技大浮博士學(xué)位一論文密級(jí)溈人軟骨特異性蛋白ChMI對(duì)骨肉瘤血管生成抑制的實(shí)驗(yàn)研究申請(qǐng)人姓名：李琪指導(dǎo)教師：夏仁云教授學(xué)科專業(yè)：骨外科研究方向：骨腫瘤、四肢損傷論文起止時(shí)間：2004年9月至2006年4月華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院研究生部二oo六年四月華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文(ChM—I)：Westernblot結(jié)果表明，在大腸桿菌中表達(dá)了分子量約為25kDa的ChM—I目的蛋白：表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni22NTA離子交換樹

2、脂純化，ChM—I蛋白的純度大于90％以上。(2)在免疫組化中靜息及增殖軟骨區(qū)中的軟骨基質(zhì)問區(qū)，以及軟骨細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中存在強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)信號(hào)，用預(yù)免疫的兔IgG處理過的陰性對(duì)照切片中無陽性染色。原位雜交中發(fā)現(xiàn)增殖區(qū)軟骨細(xì)胞的ChM—ImRNA表達(dá)水平最高。低肥大區(qū)和鈣化區(qū)的雜交信號(hào)亦呈背景水平。(3)與對(duì)照組相比，光鏡觀察可見ChM—I組細(xì)胞明顯拉長，HVEC無法形成血管樣結(jié)構(gòu)。(4)獲得了穩(wěn)定迅速生長的裸鼠骨肉瘤模型，經(jīng)過ChM—I封

3、閉注射的移植瘤周圍的毛細(xì)血管面積密度少于對(duì)照組，P001，有顯著的差異。[結(jié)論](1)ChM—I基因的克隆與表達(dá)及純化為下一步的后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究其生物活性及應(yīng)用獲得了純化的ChM—I。(2)軟骨中的ChMI蛋白存在于軟骨基質(zhì)中，和bFGF蛋白區(qū)域清楚地分開，bFGF被ChM—I緊緊地包裹在軟骨細(xì)胞外周，這種唯一的位置關(guān)系可以解釋ChM—I在軟骨中抗血管生成的特性。(3)經(jīng)ChMI作用后血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可以抑$1]HVEC血管樣