版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、腦缺血是臨床上常見的急性腦血管疾病,具有高致殘率、高致死率。如何積極有效地促進(jìn)腦缺血患者神經(jīng)功能的恢復(fù)仍然是目前腦缺血研究的重點(diǎn)。近十幾年來,人們發(fā)現(xiàn)在成年腦組織內(nèi)存在具有多種潛能的神經(jīng)干細(xì)胞(NSC),能增殖分化,可在一定條件下分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞,改變了以往認(rèn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元不能再生的認(rèn)識。大量研究表明,神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)在神經(jīng)營養(yǎng)因子和內(nèi)環(huán)境的調(diào)控下可對因缺血損傷而造成的神經(jīng)功能喪失產(chǎn)生代償和修復(fù)作用。當(dāng)
2、前,有關(guān)中醫(yī)藥對腦缺血損傷后內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響已成為研究的熱點(diǎn),中醫(yī)藥促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)功能的恢復(fù)作用是否與其誘導(dǎo)腦缺血后NSC的增殖分化有關(guān)?這為我們闡明中藥促進(jìn)腦缺血損傷后腦功能重建和再生機(jī)制,開發(fā)具有誘導(dǎo)腦缺血后內(nèi)源性NSC的增殖分化的中藥提出了新的研究思路。通心絡(luò)對腦缺血損傷后內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖分化作用的研究尚未見到,本實(shí)驗就此作一初步研究。 大量研究表明,神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)在神經(jīng)營養(yǎng)因子和內(nèi)環(huán)境的調(diào)控下
3、可對因缺血損傷而造成的神經(jīng)功能喪失產(chǎn)生代償和修復(fù)作用。而巢蛋白(neuroepithelialstemcellprotein,Nestin)作為一種在神經(jīng)干細(xì)胞中特異表達(dá)的類中間絲蛋白,在發(fā)育過程中的神經(jīng)胚胎形成階段、在神經(jīng)內(nèi)皮干細(xì)胞中特異性、一過性表達(dá),神經(jīng)前體細(xì)胞在進(jìn)行神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的終末分化之后表達(dá)下調(diào),并立即表達(dá)神經(jīng)絲(neurofilament,NF)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)。因此,Nestin被認(rèn)為是神經(jīng)前體細(xì)胞
4、的標(biāo)志,已廣泛用于NSC的鑒定。因此,探討腦缺血損傷后Nestin陽性細(xì)胞的形態(tài)、分布、數(shù)目的時程變化,有助于了解腦缺血后的神經(jīng)修復(fù)機(jī)制。BrdU是一種胸腺嘧啶脫氧核苷類似物,在細(xì)胞增殖周期的S期作為底物參與DNA的合成,嵌入細(xì)胞核DNA中,可被用于細(xì)胞增殖的標(biāo)記。因而BrdU陽性細(xì)胞可被看作是具有增殖活性的細(xì)胞。本實(shí)驗采用大鼠缺血再灌注損傷(MCAO)模型,應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)方法觀察缺血后3、5、7、14、21以及30d缺血側(cè)室管膜及室
5、管膜下區(qū)(SVZ)、海馬齒狀回(SGZ)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖分化變化。實(shí)驗顯示:大鼠腦缺血再灌注后各個時間段活動較假手術(shù)組減少,體重減輕;免疫組化雙標(biāo)顯示各時段對照組BrdU陽性細(xì)胞主要分布在缺血側(cè)皮質(zhì)、海馬(以顆粒層和齒狀回更為明顯)、室管膜上皮細(xì)胞及室下區(qū)、脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞等;部分BrdU陽性細(xì)胞同時呈Nestin染色陽性;隨缺血再灌注時間的延長,熒光強(qiáng)度值增加,其中造模后第7天大鼠海馬顆粒層和齒狀回BrdU陽性細(xì)胞熒光強(qiáng)度值最高;第14
6、天時室管膜上皮細(xì)胞及室下區(qū)、脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞的BrdU陽性細(xì)胞熒光強(qiáng)度值最高;但造模后第21天時,BrdU陽性細(xì)胞熒光強(qiáng)度和BrdU+Nestin免疫雙標(biāo)熒光強(qiáng)度值下降,但仍高于第3天時的強(qiáng)度值。給予通心絡(luò)治療后第3天缺血側(cè)海馬、室管膜及室下區(qū)BrdU+Nestin免疫雙標(biāo)熒光強(qiáng)度值:通心絡(luò)大小劑量組、模型對照組及假手術(shù)組間比較有顯著差異(SGZ區(qū):P<0.05;SVZ區(qū):P<0.05=;通心絡(luò)治療后第3、5、7、14、21、30天時海馬
7、、室管膜及室下區(qū)BrdU+Nestin免疫雙標(biāo)熒光強(qiáng)度值不同時間點(diǎn)間比較有顯著差異(SGZ區(qū):P<0.05;SVZ區(qū):P<0.05=;其中通心絡(luò)大劑量組第3、5、7、14、21、30天時熒光值均高于通心絡(luò)小劑量組。通心絡(luò)治療5天起,缺血側(cè)海馬區(qū)、室管膜和室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞開始大量增殖,第14天達(dá)最高峰,第21天已下降,但神經(jīng)干細(xì)胞仍在增殖并持續(xù)到缺血后第30天,而以通心絡(luò)大劑量組效果最為明顯。 近年研究表明,神經(jīng)干細(xì)胞通過移植或體
8、內(nèi)激活,在所在的微環(huán)境作用下,發(fā)生增殖與分化,在神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化過程中,外源性因素如生長因子、細(xì)胞因子等對其具有重要影響。已知在胚胎干細(xì)胞中,堿性成纖維生長因子(bFGF)對細(xì)胞分化起著不可忽視的作用,bFGF能使分化的細(xì)胞保持良好的狀態(tài),并能誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化。bFGF又是重要的神經(jīng)營養(yǎng)因子,在維持大腦正常生理功能中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗采用逆轉(zhuǎn)錄集合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測了缺血再灌注損傷后bFGFmRNA的
9、變化,結(jié)果顯示:假手術(shù)組幾乎檢測不到bFGFmRNA的表達(dá);大鼠腦缺血再灌注后在病灶對側(cè)僅見bFGFmRNA有少量表達(dá)。缺血再灌注模型組病灶側(cè)bFGFmRNA在不同時間段均有表達(dá),bFGFmRNA在造模后第3天開始表達(dá)增強(qiáng),隨缺血再灌注時間的延長,PCR表達(dá)增加,其中造模后第5天表達(dá)值最高,與其它時間點(diǎn)相比,統(tǒng)計學(xué)處理有顯著差異(P<0.05);但造模后第14天時,PCR表達(dá)值下降;第30天恢復(fù)到基線水平。給予通心絡(luò)治療后第3天缺血側(cè)b
10、FGFmRNA表達(dá)開始增強(qiáng),通心絡(luò)大小劑量組病灶側(cè)、缺血再灌注模型組病灶側(cè)及缺血再灌注模型組病灶對側(cè)間比較有顯著差異(P<0.05);通心絡(luò)治療后第3、5、7、14、21、30天時bFGFmRNA表達(dá)不同時間點(diǎn)間比較有顯著差異(P<0.05);表明通心絡(luò)治療第3天起,缺血側(cè)神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子bFGFmRNA表達(dá)開始大量增殖,其中造模后第5天最高,第7天已下降,但bFGFmRNA仍有表達(dá)并持續(xù)到缺血后第30天。其中通心絡(luò)大劑量組第3、
11、5、7、14、21、30天時bFGFmRNA表達(dá)與通心絡(luò)小劑量組比較無顯著差異。 通心絡(luò)是根據(jù)祖國醫(yī)學(xué)絡(luò)病學(xué)說而研制的復(fù)方中藥制劑,由人參、蜈蚣、全蝎、水蛭、土鱉蟲、蟬蛻、赤芍、冰片等組成具有益氣活血、通絡(luò)解痙之功效,臨床上有明顯促進(jìn)神經(jīng)功能康復(fù)的功效。通心絡(luò)組大鼠缺血側(cè)Nestin陽性細(xì)胞于造模后5d開始大量增殖,第14d達(dá)最高峰,第21d開始下降,并一直持續(xù)到缺血后第30天。bFGFmRNA表達(dá)上調(diào)早于Nestin陽性細(xì)胞的
12、大量增殖時間點(diǎn),bFGF可能為促進(jìn)Nestin陽性神經(jīng)干細(xì)胞增殖的因素之一。此外bFGF還具有神經(jīng)保護(hù)作用,抑制細(xì)胞凋亡,促進(jìn)神經(jīng)元軸突的生長,bFGF能減少自由基損害,保護(hù)神經(jīng)元,緩解神經(jīng)損傷。因此bFGF是一類有多種生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)。它的功能涉及到刺激神經(jīng)干細(xì)胞增殖和維持其存活,促進(jìn)成纖維細(xì)胞和血管的再生、神經(jīng)保護(hù)等許多方面。通心絡(luò)對促進(jìn)缺血再灌注腦損傷大鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞增殖,大劑量組效果優(yōu)于小劑量組。而通心絡(luò)大劑量組第3、5、7、
13、14、21、30d時bFGFmRNA表達(dá)與通心絡(luò)小劑量組比較無顯著差異。這說明通心絡(luò)除了使bFGFmRNA表達(dá)上調(diào)以外,還應(yīng)有其他的機(jī)制刺激Nestin陽性細(xì)胞的增殖分化(有待進(jìn)一步研究),從而實(shí)現(xiàn)通心絡(luò)對腦缺血再灌注損傷的治療作用。 結(jié)論 1.通心絡(luò)能促進(jìn)缺血再灌注腦損傷大鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞增殖。 2.通心絡(luò)治療5d起,缺血側(cè)海馬區(qū)、室管膜和室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞開始大量增殖,第14d達(dá)最高峰,第21d已下降,并可持續(xù)到
14、缺血后第30d。 3.通心絡(luò)對促進(jìn)缺血再灌注腦損傷大鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞增殖,大劑量組效果優(yōu)于小劑量組。 4.缺血再灌注模型大鼠病灶側(cè)bFGFmRNA在不同時間段均有表達(dá),bFGFmRNA在造模后第3天開始表達(dá)增強(qiáng),其中造模后第5d表達(dá)值最高,持續(xù)時間較長,可達(dá)30d。 5.通心絡(luò)組缺血側(cè)bFGFmRNA表達(dá)上調(diào)時間點(diǎn)早于神經(jīng)干細(xì)胞大量增殖時間點(diǎn),bFGF可能為促進(jìn)Nestin陽性神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的因素之一。
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 通心絡(luò)膠囊對大鼠腦缺血再灌注損傷后血漿ET、CGRP的影響.pdf
- 振通膠囊對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響
- BMP-7對大鼠腦缺血再灌注損傷后nestin和GFAP表達(dá)的影響.pdf
- 通心絡(luò)對腦缺血再灌注損傷后血腦屏障的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- rhGH對大鼠腦缺血再灌注損傷后細(xì)胞凋亡、血管形成及Nestin表達(dá)的影響.pdf
- 缺血后適應(yīng)對大鼠全腦缺血再灌注損傷的影響.pdf
- 阿司匹林對大鼠腦缺血再灌注損傷后VEGF表達(dá)的影響.pdf
- 旋磁場對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響.pdf
- 冠心舒通對大鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗研究.pdf
- 茶氨酸對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響.pdf
- 針刺對大鼠腦缺血再灌注損傷影響的實(shí)驗研究.pdf
- UTP對大鼠腦缺血再灌注損傷影響的實(shí)驗研究.pdf
- 缺血再灌注損傷大鼠腦內(nèi)神經(jīng)巢蛋白的變化及通心絡(luò)對它的影響
- 針刺對大鼠腦缺血再灌注后線粒體損傷相關(guān)因素影響的研究.pdf
- RGMa對大鼠腦缺血再灌注損傷后血管再生的影響及機(jī)制探討.pdf
- 黑蘇嘎-25對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響.pdf
- 大鼠腦缺血再灌注損傷后不同時間、不同部位神經(jīng)細(xì)胞Nestin的表達(dá).pdf
- 甲狀腺激素對大鼠腦缺血再灌注損傷后NGF和BDNF表達(dá)的影響.pdf
- 丙酸睪酮對大鼠腦缺血再灌注損傷后凋亡及炎癥反應(yīng)的影響.pdf
- 缺血后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf
評論
0/150
提交評論