康復(fù)訓(xùn)練對(duì)腦缺血大鼠行為學(xué)及BDNF、CB表達(dá)的影響.pdf

1、背景:
　　 缺血性腦卒中具有發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高等特點(diǎn),好發(fā)于65歲以上的人群,是神經(jīng)系統(tǒng)的常見(jiàn)病、多發(fā)病。在過(guò)去的50年里,腦卒中的死亡人數(shù)以每年數(shù)十萬(wàn)人數(shù)持續(xù)下降[1],但是腦卒中造成嚴(yán)重的肢體功能缺陷嚴(yán)重制約著腦卒中患者的日常生活。目前,腦血管病的康復(fù)治療效果及其在腦血管病綜合治療中的重要意義已被國(guó)際公認(rèn)?？祻?fù)治療是急性腦卒中治療體系中的重要組成部分,并且貫穿于治療的全過(guò)程。多年來(lái)大量實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí),中樞神經(jīng)

2、系統(tǒng)具有可塑性即功能重組的能力,康復(fù)訓(xùn)練就是在大腦可塑性理論的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。康復(fù)訓(xùn)練能夠通過(guò)增加對(duì)大腦皮質(zhì)的信息輸入,促進(jìn)突觸的可塑性變化,進(jìn)而形成新的神經(jīng)突觸并且發(fā)揮作用。大量的研究表明康復(fù)訓(xùn)練促進(jìn)了缺血性腦損傷患者的神經(jīng)功能恢復(fù),提高了患者的社會(huì)回歸率,減輕了家庭和社會(huì)的負(fù)擔(dān),因此康復(fù)訓(xùn)練越來(lái)越受到腦血管病患者和醫(yī)務(wù)工作者的重視;但是康復(fù)訓(xùn)練促進(jìn)腦缺血患者神經(jīng)功能恢復(fù)的機(jī)制尚未完全清楚。研究證實(shí),缺血性腦損傷時(shí)能夠刺激梗死區(qū)周圍

3、的某些保護(hù)性蛋白的表達(dá)增加從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,其中腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和鈣結(jié)合蛋白-D28k(Calciumbinding protein D-28k,CB)均屬于這類保護(hù)性蛋白中的成員。BDNF是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族中一員,具有調(diào)控神經(jīng)元生長(zhǎng)、分化、增殖以及調(diào)控突觸的可塑性的作用,并能防止神經(jīng)元損傷死亡、改善神經(jīng)元的病理狀態(tài)、促進(jìn)受損神經(jīng)元再生及分化等生理功能

4、;CB是鈣結(jié)合蛋白家族中最重要成員之一,能夠通過(guò)緩沖細(xì)胞內(nèi)升高的鈣離子濃度,抑制胞內(nèi)鈣超載造成的細(xì)胞毒性損害,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。本研究通過(guò)建立大腦中動(dòng)脈阻塞腦缺血(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,運(yùn)用神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分以及免疫組織化學(xué)與蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測(cè)方法(Western Blot),觀察康復(fù)訓(xùn)練對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)及梗死區(qū)周圍BDNF、CB的表達(dá)影響,探討康復(fù)訓(xùn)練在大鼠缺血性腦損傷中

5、發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。
　　 目的:
　　 探討康復(fù)訓(xùn)練對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)及梗死區(qū)周圍BDNF及CB的表達(dá)影響,研究康復(fù)訓(xùn)練促進(jìn)腦缺血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的機(jī)制。
　　 方法:
　　 108只SPF級(jí)成年雄性SD大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham-exercise,SE)、模型組(ischaemia-non-exercised control,IC)、康復(fù)組(ischaemia-exercise,IE)

6、。IC組與IE組大鼠采用線栓法制備左側(cè)大腦中動(dòng)脈腦缺血模型(MCAO),SE組僅分離、暴露頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈,不結(jié)扎,不插線栓。IE組大鼠在腦缺血24小時(shí)后進(jìn)行康復(fù)訓(xùn)練,SE組、IC組不行康復(fù)干預(yù)。分別于腦缺血第3天、7天、14天對(duì)三組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分;并通過(guò)免疫組織化學(xué)方法和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測(cè)梗死區(qū)周圍BDNF及CB的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.SE組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分為0,腦缺血第3天IE組與IC組神經(jīng)行為

7、學(xué)評(píng)分比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),腦缺血第7天、14天相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)IE組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯低于IC組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 2.免疫組織化學(xué)與蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測(cè)到BDNF、CB的表達(dá):
　　 (1)IE組與IC及SE組相比,腦缺血第3天梗死區(qū)周圍的BDNF、CB的表達(dá)水平差異不明顯無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);但腦缺血第7天、14天,IE組與IC組及SE組相比,BDNF、CB表達(dá)水平均增

8、高明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。腦缺血第3天,IC組與SE組相比,梗死區(qū)周圍BDNF、CB表達(dá)差異不明顯無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);但腦缺血第7天、14天,IC組與SE組相比,BDNF、CB表達(dá)水平均增高明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 (2)SE組梗死區(qū)周圍BDNF與CB在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)表達(dá)甚微,趨勢(shì)平穩(wěn);IC組梗死區(qū)周圍BDNF、CB的表達(dá)高峰均位于腦缺血第7天;IE組BDNF的表達(dá)高峰也位于腦缺血第7