經(jīng)鼻rhEPO對慢性腦缺血大鼠行為學及神經(jīng)元凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　觀察人重組促紅細胞生成素（rhEPO）對大鼠慢性腦缺血后行為學及神經(jīng)元凋亡的影響，探索rhEPO在慢性腦缺血大鼠神經(jīng)保護作用的機制。
　　方法：
　　將60只健康雄性SD大鼠，隨機分為假手術組，2VO組（雙側頸總動脈結扎），2VO+rhEPO組，2VO+rhEPO+AG490組（JAK2的特異性拮抗劑），2VO+AG490組(n=12)。采用雙側頸總動脈結扎法（2VO）建立永久性慢性腦缺血模型。造模3天后給

2、藥，各組分別腹腔注射DMSO(AG490的溶媒)或AG490（5mg/kg），30min后鼻腔緩慢注入生理鹽水或rhEPO（150U/125μl），每周1次，共8次。第8次給藥結束24小時后行 Morris水迷宮實驗測試大鼠空間學習和記憶能力。行為學實驗結束后，取標本分別進行 HE染色觀察神經(jīng)元形態(tài)學變化；免疫組化法檢測 JAK2， P-JAK2(Tyr10071008)，STAT3，P-STAT3(Tyr705)，Bcl-2，Bax蛋

3、白的表達水平；原位末端標記法（TUNEL）法檢測凋亡細胞數(shù)；實時定量RT-PCR檢測Bcl-2，Bax的mRNA的表達水平。
　　結果：
　　1.Morris水迷宮實驗測試結果：評價大鼠學習并獲取空間信息的能力和空間記憶能力。（1）定位航行實驗：實驗檢測到訓練期間大鼠平均速度無顯著差異，且每天各組之間比較無明顯差異。隨著訓練日期增加，5組大鼠平均逃避潛伏期明顯縮短，差異具有統(tǒng)計學意義（F=23.648，p<0.0001）；2

4、VO+rhEPO組逃避潛伏期較2VO組明顯縮短，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05），與假手術組比較差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）；2VO+rhEPO+AG490組逃避潛伏期較2VO+rhEPO組延長，從第二天開始兩者差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。2VO組，2VO+rhEPO+AG490組，2VO+AG490組逃避潛伏期差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。（2）空間探索實驗：2VO+rhEPO組目標象限停留時間與穿越平臺次數(shù)較2VO組均

5、明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05），與假手術組比較差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。2VO+rhEPO+AG490組目標象限停留時間與穿越平臺次數(shù)均較2VO+rhEPO明顯縮短，差異有統(tǒng)計學意義（ p<0.05）。2VO組，2VO+rhEPO+AG490組，2VO+AG490組目標象限停留時間、穿越平臺次數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。2.HE染色結果顯示：假手術組神經(jīng)元形態(tài)學未見明顯缺血性改變，細胞結構緊密，排列整齊。2

6、VO組神經(jīng)元缺失較多，殘留的神經(jīng)細胞邊緣模糊，排列松散不規(guī)則，胞漿皺縮,邊緣出現(xiàn)空泡，核深染，核固縮、核溶解。2VO+rhEPO組神經(jīng)元形態(tài)學有輕微改變，排列較整齊。2VO組，2VO+rhEPO+AG490組，2VO+AG490組，神經(jīng)元形態(tài)學改變類似。3.免疫組化及實時定量RT-PCR的結果：（1）與假手術組比較，2VO組中P-JAK2和P-STAT3表達增強，上調(diào)Bcl-2、Bax的表達(p<0.05)。(2)與2VO組比較，2VO

7、+rhEPO組增強P-JAK2、P-STAT3蛋白的表達，并上調(diào) Bcl-2的表達和下調(diào) Bax的表達(p<0.05)。(3)與2VO+rhEPO組比較，2VO+rhEPO+AG490組可抑制EPO誘導的P-JAK2、P-STAT3的表達，下調(diào)Bcl-2的表達和上調(diào)Bax的表達（p<0.05)。(4)2VO+AG490組中P-JAK2、P-STAT3、Bcl-2、Bax的表達與2VO組和2VO+rhEPO+AG490組組間比較無統(tǒng)計學差