特異激活SHH信號通路對急性腦缺血大鼠NGF、BDNF表達的影響.pdf

1、背景和目的：
　　缺血性腦血管疾病的病理損傷機制極為復(fù)雜。近年來的研究發(fā)現(xiàn)了一些具有神經(jīng)保護作用的因子，在缺血性腦血管疾病的恢復(fù)過程中發(fā)揮著重要作用。其中，神經(jīng)生長因子(nerve growth factor,NGF)與腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)二者屬于神經(jīng)生長因子家族，也稱神經(jīng)營養(yǎng)素(NTs)。兩者能夠促進中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，對于神經(jīng)系統(tǒng)中成熟神經(jīng)元的正常功

2、能的維持也是非常必要的。
　　Shh信號通路在胚胎發(fā)育及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中扮演十分重要的角色。實驗研究證實，腦缺血后激活Shh信號通路可以促進室下區(qū)(subventricular zone，SVZ)神經(jīng)元細胞的再生。Shh信號通路由以下幾部分組成:Shh蛋白、Ptch蛋白、Smo蛋白和鋅指轉(zhuǎn)錄因子Gli蛋白。Shh信號通路被激活以后，Shh和Ptch結(jié)合，解除Smo的抑制效應(yīng)，Smo可促使細胞核中的Gli蛋白誘導目的基因的表達。下

3、游靶基因Gli蛋白的表達將增加，因此可以將Gli蛋白作為Shh信號是否激活的標志。
　　本實驗通過線栓法制作永久性大腦中動脈缺血模型，通過免疫組化法檢測缺血側(cè)腦組織中NGF、BDNF的表達，觀察Purmorphamine特異激活Shh信號通路后NGF、BDNF的變化進而論述激活Shh信號通路在腦缺血中的神經(jīng)保護作用。
　　材料與方法：
　　選取SD大鼠，運用線栓法制作永久性大腦中動脈缺血模型(MCAO)。選取健康成年雄

4、性SD大鼠110只，SPF級，體重190～250g。實驗分組如下:假手術(shù)組（A組）;缺血組（B組）;藥物干預(yù)組（C組）。其中，假手術(shù)組10只，缺血組和藥物干預(yù)組按照時間點的不同可分為5個亞組即6h，24h，48h，72h，7天，每個亞組10只。假手術(shù)組只分離血管不插線栓。缺血組和藥物干預(yù)組采用線栓法造模。藥物干預(yù)組在造模成功后立即腹腔注射Purmorphamine溶液（0.691mg/kg）。Purmorphamine溶液配制方法:溶于

5、有機溶劑二甲基甲酰胺(DMF)，并且完全溶解。假手術(shù)組和缺血組給予同等劑量的DMF。成功造模后，觀察實驗動物是否具有神經(jīng)缺損癥狀，依據(jù)標準評分法，評分不達標的動物均棄之不用，排除出組的動物在后續(xù)的試驗中予以補充。于既定時間點，取出腦組織標本。免疫組化法檢測缺血側(cè)腦組織的NGF、BDNF的表達，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應(yīng)(Real-time PCR)檢測缺血側(cè)腦組織Gli-1mRNA的表達。
　　數(shù)據(jù)處理：
　　采用SPSS21.0統(tǒng)計

6、軟件處理數(shù)據(jù)，所有結(jié)果均采用均數(shù)±標準差（x±s）表示。組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗，檢驗水準:a=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.各組NGF的表達情況
　　假手術(shù)組有少量NGF表達。缺血組、藥物干預(yù)組在缺血后6小時即有表達。24小時表達明顯增多，在缺血72小時達到峰值，之后呈下降趨勢。缺血組、藥物干預(yù)組和假手術(shù)組相比，NGF表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。藥物干預(yù)組和缺血組各時間點

7、相比，NGF表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.各組BDNF的表達情況
　　假手術(shù)組有少量BDNF表達。缺血組、藥物干預(yù)組在缺血后6小時即有表達。至72小時達到峰值，之后呈下降趨勢。缺血組、藥物干預(yù)組和假手術(shù)組相比，BDNF表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。藥物干預(yù)組和缺血組各時間點相比，BDNF表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　3.各組Gli-1mRNA的

8、表達情況
　　假手術(shù)組有少量Gli-1mRNA表達。缺血組、藥物干預(yù)組在缺血后6小時即有表達。24小時表達明顯增多，之后呈下降趨勢。缺血組、藥物干預(yù)組和假手術(shù)組相比，Gli-1mRNA表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。藥物干預(yù)組和缺血組各時間點，Gli-1mRNA表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.外源性給予Purmorphamine后，可以有效激活Shh信號通路。<