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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:感染是血液腫瘤患兒最常見(jiàn)的合并癥和重要死因之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)60%~70%的白血病/淋巴瘤患者死于感染。由于惡性腫瘤患兒化療后骨髓抑制明顯和中性粒細(xì)胞減少,加之免疫力低下,引起感染的機(jī)會(huì)增多,常成為患兒病情加重、治療失敗、甚至導(dǎo)致死亡的主要原因,嚴(yán)重影響了惡性腫瘤的治療和預(yù)后,故查找并分析感染的途徑及病因成為臨床兒科醫(yī)師必須面對(duì)的問(wèn)題。而腸道是機(jī)體最大的細(xì)菌和內(nèi)毒素儲(chǔ)存庫(kù),正常情況下機(jī)體與正常菌群之間保持著動(dòng)態(tài)的微生態(tài)平衡,以雙歧桿菌為
2、主的專(zhuān)性厭氧菌與腸粘膜表面特異性受體相結(jié)合,形成相當(dāng)穩(wěn)定的菌膜結(jié)構(gòu),構(gòu)成抗定植力的生物屏障,可有效抵抗細(xì)菌對(duì)機(jī)體的侵襲,在維持腸道結(jié)構(gòu)和功能中起重要作用。一旦這種生態(tài)平衡和生物屏障被破壞,就可使大量的細(xì)菌和內(nèi)毒素經(jīng)門(mén)脈系統(tǒng)進(jìn)入體循環(huán)造成腸源性內(nèi)毒素血癥和細(xì)菌縱向易位,并在一定條件下激發(fā)細(xì)胞因子和其他炎性介質(zhì)的連鎖反應(yīng)引起全身器官的損害。因此對(duì)惡性血液腫瘤患兒腸道菌群的定量分析有助于了解疾病本身及化療藥物對(duì)腸道菌群的影響程度,從微生態(tài)的角
3、度分析化療藥物與腸道菌群變化的相互關(guān)系,并為微生態(tài)調(diào)節(jié)劑用于感染和化療副作用的預(yù)防及治療提供依據(jù)。
微生態(tài)調(diào)節(jié)劑是根據(jù)微生態(tài)學(xué)原理,通過(guò)調(diào)整微生態(tài)失調(diào),保持微生態(tài)平衡,提高宿主的健康水平,利用對(duì)宿主有益的正常微生物或促進(jìn)物質(zhì)所制成的制劑,包括益生菌及其代謝產(chǎn)物和生長(zhǎng)促進(jìn)因子。微生態(tài)調(diào)節(jié)劑能直接補(bǔ)充機(jī)體的正常菌群或選擇性刺激正常菌群的生長(zhǎng)繁殖,從而競(jìng)爭(zhēng)性地抑制外源性致病菌及內(nèi)源性條件致病菌的過(guò)度生長(zhǎng)及定植,有效地防止內(nèi)源性感
4、染的發(fā)生及發(fā)展。目前在臨床上微生態(tài)調(diào)節(jié)劑主要應(yīng)用于腹瀉病及肝臟疾病的治療,在小兒血液惡性腫瘤化療過(guò)程中預(yù)防性應(yīng)用微生態(tài)調(diào)節(jié)劑來(lái)減少內(nèi)源性感染的研究甚少。本研究通過(guò)16SrRNA/DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)惡性腫瘤患兒在化療過(guò)程中不同骨髓抑制程度腸道中大腸桿菌和雙歧桿菌的變化進(jìn)行定量分析,并與健康組和干預(yù)組進(jìn)行比較,以了解化療中不同骨髓抑制程度患兒腸道內(nèi)大腸桿菌和雙歧桿菌的變化狀態(tài)、以及微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)化療患兒腸道菌群狀態(tài)的影響情況,探
5、討微生態(tài)調(diào)節(jié)劑對(duì)于維持化療過(guò)程中惡性腫瘤患兒腸道菌群平衡的干預(yù)作用。并以期利用這種作用減少或減輕惡性腫瘤患兒化療過(guò)程中各種腸源性感染發(fā)生的機(jī)會(huì),從而保證化療的順利實(shí)施,提高治療水平,延長(zhǎng)患兒的生存期。
方法:
1、分組
選擇河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院及河北省兒童醫(yī)院血液科收治的惡性腫瘤患兒40例,其中淋巴瘤30例,白血病10例,淋巴瘤用CAM、BB等方案,白血病用CAM、DAE等方案,并隨機(jī)分為兩組,
6、一組為觀察組,一組為干預(yù)組,另隨機(jī)選擇某小學(xué)正常兒童20例作為健康對(duì)照組。干預(yù)組于化療當(dāng)天開(kāi)始口服微生態(tài)調(diào)節(jié)劑-雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片(金雙歧),劑量按藥品說(shuō)明書(shū)規(guī)定劑量口服,至骨髓抑制Ⅳ級(jí)時(shí)停止。以上三組中:觀察組平均年齡7.2(±1.5)歲,男:女=1:1.12;干預(yù)組平均年齡7.0(±1.5)歲,男:女=1:1.15;健康對(duì)照組平均年齡6.9(±1.2)歲,男:女=1:1.2;三組年齡、性別比較均無(wú)差異(P>0.05),以上選擇
7、對(duì)象2周內(nèi)均無(wú)抗生素應(yīng)用史及胃腸疾病史。
2、標(biāo)本
每組中患兒每人分別留取骨髓抑制為0級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅳ級(jí)時(shí)糞便標(biāo)本,0級(jí)取化療前糞便,用無(wú)菌離心管收集,編號(hào)后置-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 2.1腸道細(xì)菌DNA的制備按照糞便細(xì)菌基因組DNA提取盒上的操作說(shuō)明提取糞便標(biāo)本中細(xì)菌DNA及標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA.。
2.2常規(guī)PCR反應(yīng)對(duì)提取的細(xì)菌DNA進(jìn)行定性分析。
2.3熒光定量PCR反
8、應(yīng),繪制溶解曲線,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線及定量分析。
結(jié)果:
1、對(duì)照組、觀察組和干預(yù)組糞便標(biāo)本中雙歧桿菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值比較對(duì)照組雙歧桿菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值為9.23±0.59,觀察組0、Ⅱ、Ⅳ級(jí)骨髓抑制時(shí)雙歧桿菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值分別為7.26±0.41、4.33±0.66、4.18±0.31;干預(yù)組0、Ⅱ、Ⅳ級(jí)骨髓抑制時(shí)雙歧桿菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值分別為7.18±0.44、6.16±0.26、6.21±0.21,經(jīng)統(tǒng)計(jì),觀察組和干預(yù)組0
9、級(jí)骨髓抑制時(shí)雙歧桿菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值較對(duì)照組明顯減少,有顯著差異(P<0.05);觀察組和干預(yù)組0級(jí)骨髓抑制時(shí)雙歧桿菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值之間無(wú)顯著差異(P>0.05);觀察組和干預(yù)組Ⅱ、Ⅳ級(jí)骨髓抑制時(shí)雙歧桿菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值之間比較均有顯著差異(P<0.05)。
2、對(duì)照組、觀察組和干預(yù)組糞便標(biāo)本中大腸桿菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值比較對(duì)照組大腸桿菌細(xì)菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值為7.44±0.48,觀察組0、Ⅱ、Ⅳ級(jí)骨髓抑制時(shí)大腸桿菌細(xì)菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值分別為6.6
10、5±0.30、3.92±0.46、4.01±0.21;干預(yù)組0、Ⅱ、Ⅳ級(jí)骨髓抑制時(shí)大腸桿菌細(xì)菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值分別為6.68±0.52、4.09±0.19、4.16±0.18,經(jīng)統(tǒng)計(jì),干預(yù)組和觀察組0級(jí)大腸桿菌細(xì)菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值較對(duì)照組大腸桿菌數(shù)量有顯著差異(P<0.05);觀察組和干預(yù)組在0級(jí)骨髓抑制時(shí)大腸桿菌細(xì)菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值之間無(wú)顯著差異(P>0.05);觀察組和干預(yù)組Ⅱ、Ⅳ級(jí)骨髓抑制時(shí)大腸桿菌細(xì)菌數(shù)量的對(duì)數(shù)值之間比較有顯著差異(P<0.
11、05)。
結(jié)論:
1、血液腫瘤患兒化療前腸道內(nèi)雙歧桿菌和大腸桿菌較健康兒童減少,表明血液腫瘤患兒化療前腸道菌群就已處于一定程度的失衡狀態(tài)。
2、化療過(guò)程中血液腫瘤患兒腸道內(nèi)大腸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量進(jìn)一步減少,骨髓抑制程度達(dá)Ⅱ級(jí)時(shí)腸道菌群數(shù)量降至最低,表明化療藥物可抑制腸道正常菌群生長(zhǎng),加重腸道菌群失調(diào),骨髓抑制Ⅱ級(jí)時(shí)抑制作用最明顯。
3、微生態(tài)調(diào)節(jié)劑雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片可明顯增加
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